3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.6.1.Theo dõi các yếu tố thủy lý, thủy hóa
- Nhiệt độ nước đo bằng nhiệt kế thuỷ ngân (hàng ngày lúc 14giờ). - Độ pH: đo bằng pH kế (hàng ngày lúc 14giờ ).
- NH3, NO2: Đo trên Sera test kit (1lần/tuần lúc 14giờ).
3.6.2. Theo dõi yếu tố vi sinh: Mật độ Vibrio tổng số trong nước (2 ngày/lần)
và trong ruột cá (1 tuần/lần)
- Cách xác định mật độ Vibrio tổng số trong nước nuôi:
Định kỳ 2 lần/tuần (thứ 2 và thứ 5) thu mẫu nước ở 12 bể ương cá, dụng cụ thu mẫu bằng făngcon 50ml. Tại phòng thí nghiệm, tiến hành lắc đều mẫu trước khi cấy.
Lấy 50μl từ mỗi mẫu nước tiến hành tráng đĩa trên môi trường TCBS. Sau đó, đem ủ ở điều kiện nhiệt độ 300C, thời gian ủ 24 giờ để khuẩn lạc hình thành.
Sau 24 giờ, tiến hành định lượng vi khuẩn bằng phương pháp đếm khuẩn lạc.
Kết quả mật độ Vibrio tổng số được tính theo công thức là: Mi (CFU/ ml) = Ai x 20
Trong đó: Ai là số khuẩn lạc trung bình trên 1 đĩa và 20 là hằng số cần thiết để đưa về số ml nước cho vào mỗi đĩa (1ml).
Trường hợp thấy mật độ Vibrio lần trước dày (trên 300 khuẩn lạc) thì lần sau pha loãng đi 10 lần và tiếp tục pha loãng đi 100 lần nếu lần thứ hai vẫn thấy dày. Lúc này công thức tính Vibrio tổng số sẽ là:
Với Di là độ pha loãng
- Cách xác định Vibrio tổng số trong ruột cá:
Định kỳ 1 lần/tuần (thứ 5) thu mẫu cá ở 12 bể ương (10 con/bể). Tiến hành nghiền (cả 10 con) với 10ml nước muối 20‰. Sử dụng kỹ thuật hộp trải (Trần Linh Thước, 2007), mỗi mẫu ruột tiến hành kiểm tra 1 lần trên môi trường TCBS. Sau đó, đem ủ ở điều kiện nhiệt độ 30oC, thời gian ủ 24 giờ để khuẩn lạc hình thành.
Sau 24 giờ, tiến hành định lượng vi khuẩn bằng phương pháp đếm khuẩn lạc.
Cuối cùng, xác định kết quả Vibrio tổng số được tính theo công thức là: Mj (CFU/ ml) = Aj x 20 hay Mj (CFU/ cá) = Aj x 20
Trong đó: Aj là số khuẩn lạc trung bình trên 1 đĩa, Di độ pha loãng và 20 là hằng số cần thiết để đưa về số ml nước cho vào mỗi đĩa (1ml).