Mục tiêu: Xác định liều gây chết 50 % trên phôi vịt và khảo sát bệnh lý của virus viêm gan vịt type I gây ra trên phôi vịt.
Bố trí thí nghiệm:
Chuẩn bị trứng: chọn 50 trứng vịt sạch, có trọng lượng và kích thước tương đối đồng đều được lấy từ đàn vịt bố mẹ khỏe mạnh, chưa được tiêm vaccine phòng bệnh viêm gan do virus ở vịt. Sát trùng bằng cồn 70o sau đó đem ấp ở nhiệt độ 37oC. Sau khi ấp 7 ngày tiến hành soi trứng để loại bỏ những trứng không phôi hoặc chết phôi. Trứng ấp đến 12 ngày tuổi soi lại lần 2 chọn trứng có phôi còn sống để gây nhiễm virus.
Cách tiêm: soi trứng, dùng bút chì đánh dấu buồng hơi và đầu phôi và mạch máu. Sát trùng vỏ trứng bằng cồn 70o. Dùng dùi nhọn dùi thủng vỏ trứng ngay đỉnh buồng hơi và một lỗ ở vị trí tiêm xa phôi và xa mạch máu. Sau khi tiêm xong hàn vỏ trứng lại bằng paraffine và cho vào máy ấp ở 37oC.
18
Dung dịch tiêm: dùng virus viêm gan vịt type I pha loãng với dung dịch PBS thành 8 nồng độ theo cơ số 10 từ 10-1 đến 10-8 , mỗi nồng độ tiêm cho 5 trứng vịt có phôi, mỗi trứng tiêm 0,2 ml dung dịch virus viêm gan vịt type I vào xoang niệu mô. Bố trí thí nghiệm được trình bày qua bảng 3.1.
Bảng 3.1 Bố trí thí nghiệm gây nhiễm trên phôi vịt Độ pha loãng
virus
Số trứng Liều virus (ml)
Vị trí tiêm
10-1 5 0,2 Xoang niệu mô
10-2 5 0,2 Xoang niệu mô
10-3 5 0,2 Xoang niệu mô
10-4 5 0,2 Xoang niệu mô
10-5 5 0,2 Xoang niệu mô
10-6 5 0,2 Xoang niệu mô
10-7 5 0,2 Xoang niệu mô
10-8 5 0,2 Xoang niệu mô
Sau khi tiêm, định kỳ 6 giờ soi trứng một lần để kiểm tra phôi. Nếu phôi chết thì mổ trứng ra để quan sát bệnh tích trên phôi, ghi nhận bệnh tích và thời gian chết phôi.
Cách tính liều ELD50: tính liều ELD50 nhờ vào phương pháp Biometry của Reed & Muench (1938).
dp = % 50 % 50 50 50 L L L lg ELD50 = lg ELD<50 + dp x lg f Chú thích
dp (Proportion dose): khoảng cách tỷ lệ L<50%: phần trăm tử số chết dưới 50 % L>50%: phần trăm tử số chết trên 50 % lg f: Lg10 = 1
Chỉ tiêu theo dõi
Tỷ lệ chết phôi theo nồng độ (%) = x 100
Tỷ lệ phôi chết theo thời gian (%) = x 100 Số phôi chết cùng nồng độ
Tổng số phôi của nồng độ
Số phôi chết cùng thời điểm Tổng số phôi thí nghiệm
19
Tần suất xuất hiện bệnh tích trên phôi (%) = x 100