Để cĩ thể tính được hiệu suất thu hồi ta phải thêm lượng chất chuẩn biết trước hàm lượng vào mẫu cần phân tích và cĩ mẫu trắng đối chứng để so sánh.
Cách thức tiến hành: Ở đây chúng tơi khảo sát hiệu suất thu hồi chung của cả quy trình trích và khảo sát sự mất mát riêng của khâu lọc bã và của bã sĩt lại.
Khảo sát độ thu hồi của cả quy trình trích ly Vitamin C trong cải bắp
Chuẩn bị mẫu trích ly: lấy 4 mẫu cải bắp cùng từ một trái, mỗi mẫu cân 25g. Sau đĩ tiến hành xử lý mẫu như sau:
- Mẫu 1: khơng bổ thêm chuẩn Vitamin C
- Mẩu 2: bổ sung thêm 5ml dung dịch chuẩn 1000 ppm Vitamin C vào rau - Mẫu 3: bổ sung thêm 10 ml dung dịch chuẩn 1000 ppm Vitamin C vào rau - Mẫu 4: bổ sung thêm 15 ml dung dịch chuẩn 1000 ppm Vitamin C vào rau.
Hình 3.3:Quy trình trích ly Vitamin C 25g rau Xay Lọc chân khơng Định mức 100mL Siêu lọc Dịch chiết Vitamin C 75 mL dd đệm
Tiến hành trích ly các mẫu đã xử lý trên theo quy trình trích ly như mục 3.9.1 thu được dịch lọc chuẩn bị cho phân tích HPLC. Đồng thời cũng pha lỗng từ dung dịch gốc 1000 ppm thành các dung dịch cĩ nồng độ 5 ppm, 10 ppm, 15 ppm.
Dịch lọc thu được của các mẫu tiến hành pha lỗng lên 10 lần bằng cách lấy mỗi mẫu dịch 1ml cho vào bình định mức 10 ml và định mức tới vạch bằng dung dịch đệm pH =2,8. Đánh siêu âm các mẫu trước khi phân tích trên máy.
Đo mẫu trên máy HPLC. Mỗi mẫu đo lặp lại 3 lần, lấy giá trị trung bình diện tích peak đo được.
Khảo sát sự mất mát Vitamin C trong bã và quá trình lọc.
Lấy 4 mẫu cải bắp mỗi mẫu 50g từ cùng một trái. Sau đĩ tiến hành quy trình trích ly như mục 3.9.1. Dịch lọc thu được sau khi lọc chân khơng tiến hành xử lý như sau:
- Dịch lọc mẫu 1: khơng bổ sung chuẩn Vitamin C
- Dịch lọc mẫu 2: bổ sung thêm 5 ml dung dịch chuẩn Vitamin C - Dịch lọc mẫu 3: bổ sung thêm 10 ml dung dịch chuẩn Vitamin C - Dịch lọc mẫu 4: bổ sung thêm 15 ml dung dịch chuẩn Vitamin C.
Tiếp tục quy trình trích và thu được dịch trích sau siêu lọc qua màng 0,45 µm. Pha lỗng dịch trích mỗi mẫu lên 10 lần, đánh siêu âm tất cả các mẫu và tiến hành phân tích trên máy HPLC. Mỗi mẫu đo lặp lại 3 lần, lấy giá trị trung bình diện tích peak đo được.
Chương 4: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN