Chuẩn độ với 2,6- dichloroindophenol (DCP)
Đây là một phương pháp hữu dụng để định lượng Vitamin C trong rau quả. Cơ sở của phương pháp này là phản ứng oxi hĩa acid ascorbic trong dung dịch bởi DCP thành dạng dehydroascorbic acid. Sản phẩm của phản ứng oxy hĩa khử này đều khơng màu.
Phương trình phản ứng:
(pH=3)
C6H8O6 (khơng màu) + C12H7O2NCl2(đỏ) C6H6O6 (khơng màu) + C12H9O2NCl2 (khơng màu) Sự chuẩn độ này đặc biệt thuận lợi bởi vì DCP cũng đĩng vai trị như chất chỉ thị màu. Khi nhỏ dung dịch DCP vào một dung dịch cĩ chứa Vitamin C, thì hỗn hợp phản ứng khơng màu cho đến khi tất cả lượng Vitamin C cĩ trong hỗn hợp chuyển hết thành
dạng dehydroascorbic acid. Giọt dung dịch DCP tiếp theo thêm vào nếu xuất hiện màu đỏ chứng tỏ đĩ là giọt DCP cịn dư và phản ứng đã kết thúc. Do đĩ, điểm tương đương được xác định (chỉ thị) khi dung dịch chuẩn độ từ khơng màu chuyển sang màu đỏ của DCP.
Yếu điểm của phương pháp này là dung dịch DCP rất kém bền nên chúng ta chỉ pha dung dịch ngay trước khi sử dụng chúng.
Trước khi tiến hành chuẩn độ, cần xử lý mẫu thực phẩm với metaphosphoric acid. Bước xử lý với acid này nhằm làm biến tính và kết tủa protein trong mẫu để tránh ảnh hưởng đến kết quả phân tích, đồng thời cũng nhằm giúp ổn định acid ascorbic tránh bị phân huỷ. Acid hố đến pH nhỏ hơn 4 cũng nhằm làm giảm phản ứng của DCP với các hợp chất khác.
Chuẩn độ bằng iode
Đây là qui trình chuẩn độ ngược, lượng ion
3
I dư trong dung dịch sau khi đã phản ứng với Vitamin C được xác định bằng cách cho phản ứng với dung dịch thiosulfate. Cơ sở của phương pháp chuẩn độ Vitamin C bằng Iod là phản ứng oxi hố Vitamin C thành dehydroascorbic acid, C6H6O6 theo phương trình sau :
C H O H OC H O I H I3 6 8 6 2 6 6 6 3 2 Lượng ion 3
I trong dung dịch sau khi Vitamin C đã phản ứng hết sẽ được xác định bằng phép chuẩn độ với dung dịch thiosulfate 2
3 2O
S theo phương trình sau:
2 6 4 2 3 2 3 2 S O 3I S O I
Cĩ một khĩ khăn là phải pha chế dung dịch
3
I từ dung dịch KIO3 và muối rắn KI trong điều kiện acid như phương trình sau:
) ( 3 ) ( 3 ) ( 9 ) ( 8 ) ( ) ( 6H aq KIO3 aq KI s K aq I3 aq H2O l Lượng 3
I tạo thành cĩ thể được tính tốn thơng qua lượng KI và KIO3 đã sử dụng. Lượng này trừ đi lượng dư trong chuẩn độ với thiosulfate sẽ thu được lượng
3
I
đã phản ứng với acid ascorbic.