- Đáp ứng miễn dịch cục bộ ở da
5.CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM CẢM NHIỄM VI KHUẨN Ở CÁ
- Khử trùng bể thí nghiệm (30 lít) và các dụng cụ bằng 10% chlorine - Cho nước vào 2/3 bể
- Thuần hóa cá (50 g/con) một tuần trước khi thí nghiệm - Cho ăn 2% trọng lượng thân, thay nước 30% mỗi ngày - Bố trí thí nghiệm mỗi bể 25 con
Bể 1: đối chứng
Bể 2: đối chứng, nước muối sinh lý Bể 3: vi khuẩn, thuốc
Bể 4: vi khuẩn 1, nước muối sinh lý Bể 5: vi khuẩn 2, thuốc
Bể 6: vi khuẩn 2, nước muối sinh lý ……….
- Chuẩn bị vi khuẩn gây cảm nhiễm:
+ Chủng vi khuẩn dùng khảo nghiệm phải là chủng đã được xác định là có khả năng gây đúng bệnh muốn đều trị
+ Kiểm tra tính ròng và các đặc điểm sinh lý, sinh hóa của chủng vi khuẩn cần gây cảm nhiễm
+ Cấy một khuẩn lạc vào ống nghiệm chứa 10 ml nutrient Broth (NB) và
+ Rửa 2 lần bằng PBS
+ Nồng độ 104 CFU/ml trong PBS + Tiêm vào môic cá 100 μl
- Trong quá trình thí nghiệm:
+ Nước muối sinh lý (0,85% NaCl) + PBS:
NaCl: 4,80 g KH2PO4: 1,25 g
Na2HPO4.2H2O: 9,50 g Nước cất thêm vào 1.000 ml
Hòa tan các chất trên trong nước cất, chỉnh pH 7,4
Cho dung dịch vào chai 200 ml và thanh trùng ở 1210C trong 15 phút + Đo chiều dài và trọng lượng cá trước khi cảm nhiễm
+ Chuẩn bị thuốc theo liều chỉđịnh của nhà sản xuất + Chuẩn bị nước muối sinh lý
+ Đo chiều dài và trọng lượng cá trước khi tiêm thuốc + Tiêm thuốc hoặc nước muối sinh lý
+ Gây cảm nhiễm một tuần sau khi vận chuyển
+ Trong quá trình gây cảm nhiễm quan sát các dấu hiệu bệnh và số ngày sau khi gây cảm nhiễm
+ Phân lập và tái định danh vi khuẩn từ cá mới chết có dấu hiệu bệnh + Sử dụng thuốc điều trị ngay sau khi phân lầp
+ Kết thúc thí nghiệm một tuần sau khi điều trị, đo chiều dài và trọng lượng cá trước khi kết thúc thí nghiệm
+ Hàng ngày cho ăn 2% trọng lượng thân
+ Giữ nhiệt độ phòng ổn định (theo nhiệt độở trại giống) + Hàng ngày thay 30% thể tích nước mỗi bể
+ Phải khử trùng triệt để nước thay từ bể gây cảm nhiễm (25 ppm chlorine) để tránh làm lây lan bệnh