4. Kết quả nghiên cứu và thảo luận
4.5.3. Thành phần sinh học
Sữa cũng chứa những thành phần sinh học, đó là các tế bào có nguồn gốc từ máu, từ tuyến vú và các vi sinh vật. Ngay cả khi tuân thủ nghiêm ngặt tất cả các biện pháp vệ sinh, sữa vẫn chứa một l−ợng tế bào (khoảng 100.000- 200.000 tế bào trong 1ml sữa) và có chứa các vi sinh vật (chủ yếu là các vi sinh vật trong ống núm vú).
Khi gia súc bị bệnh viêm vú số l−ợng tế bào và số l−ợng vi sinh vật trong sữa tăng lên rất nhanh, có tới hàng trăm triệu tế bào trong 1ml sữa. Ngoài các tế bào biểu mô tuyến sữa, còn có các loại tế bào từ máu, dịch lâm ba vào sữa nh− bạch cầu đơn nhân, lâm ba cầu, bạch cầu đa nhân. Số l−ợng các bạch cầu này trong sữa cho phép ta đánh gía đ−ợc tình trạng vệ sinh và chất l−ợng của sữa .
Do vậy, bên cạnh việc kiểm tra độ axit của sữa thì kiểm tra số l−ợng tế bào trong sữa cũng là một chỉ tiêu quan trọng trong việc đánh giá vệ sinh và chất l−ợng của sữa.
- Kết quả kiểm tra số l−ợng tế bào trong sữa ở bò sữa bị viêm vú:
+ Kết quả kiểm tra số l−ợng tế bào trong sữa ở bò sữa bị viêm vú bằng ph−ơng pháp CMT (California Mastitis Test)
Tổng số tế bào thân trong sữa tr−ờng ít hơn 200.000/ml. Trong quá trình viêm nhiễm, tế bào somatic của tuyến vú sẽ tăng lên tới hàng triệu tế bào trong 1ml sữa. Mức độ cao hơn 400.000 tế bào cho thấy sự không bình th−ờng của bầu vú. Hầu hết sự tăng lên này là tế bào trung tính di chuyển từ máu đến tuyến vú để đáp ứng lại sự xâm nhiễm của vi khuẩn.
Những phản ứng CMT liên quan nhiều đến số l−ợng tế bào thân. Các
phản ứng d−ơng tính đánh giá mức độ viêm vú ở bò. L−ợng tế bào thân có xu h−ớng tăng trong thời gian tiết sữa và vẫn giữ số l−ợng cao trong vài giờ sau đó, kể cả những núm vú không bị bệnh, do đó chúng tôi tiến hành lấy mẫu ngay khi bắt đầu vắt sữa và chỉ bỏ vài giọt sữa đầu. Bằng ph−ơng pháp dùng thuốc thử CMT chúng tôi kiểm tra số l−ợng tế bào trong sữa ở 150 mẫu sữa lấy từ những bò sữa bị viêm vú. Kết quả đ−ợc trình bày ở bảng 4.9.
Bảng 4.9. Kết quả kiểm tra tế bào trong sữa ở bò sữa bị viêm vú cấp bằng ph−ơng pháp dùng thuốc thử CMT (California Mastitis Test)
Âm tính D−ơng tính Đợt lấy mẫu Số mẫu (n) n Tỉ lệ (%) + ++ +++ ++++ n Tỉ lệ (%) I 30 0 0 6 12 12 0 30 100 II 18 0 0 0 12 6 0 18 100 III 30 0 0 12 12 6 0 30 100 IV 36 0 0 12 6 12 6 36 100 V 36 0 0 0 0 24 12 36 100 ∑ ∑ ∑ ∑ 150 0 0 30 42 60 18 150 100
Kết quả bảng 4.9 cho thấy: trong 150 mẫu lấy từ những bò sữa bị viêm vú thì 100% số mẫu đem kiểm tra bằng thuốc thử CMT đều cho kết quả d−ơng tính, tuy nhiên mức độ d−ơng tính lại khác nhau ở mỗi mẫu.
Với tổng số 150 mẫu sữa kiểm tra, trong đó có:
- 30 mẫu sữa cho kết quả d−ơng tính mức + chiếm 20,00%. - 42 mẫu cho kết quả d−ơng tính mức ++ chiếm 28,00%. - 60 mẫu cho kết quả d−ơng tính mức +++ chiếm 40,00%. - 18 mẫu cho kết quả d−ơng tính mức ++++ chiếm 12,00%.
ảnh 4.3. Phản ứng CMT ở các mức độ khác nhau
Theo kết quả nghiên cứu của chúng tôi thì phần lớn các mẫu sữa đều cho kết quả d−ơng tính ++ và +++. Nguyên nhân là do các mẫu sữa mà chúng tôi tiến hành dùng thuốc thử CMT đ−ợc lấy từ những bò sữa đk có biểu hiện bị viêm vú.
Kết quả nghiên cứu của Lê Thị Thịnh (1998) [16] cho thấy có 33,00% mẫu sữa đem kiểm tra cho kết quả d−ơng tính, trong đó mức độ d−ơng tính mạnh chiếm 11,50%. So với kết quả nghiên cứu của Lê Thị Thịnh thì kết quả nghiên cứu chúng tôi cao hơn.
chẩn đoán bệnh viêm vú bằng ph−ơng pháp CMT ở một số cơ sở chăn nuôi bò sữa thấy tỉ lệ viêm vú phi lâm sàng là 24,8%.
Nguyễn Ngọc Nhiên, Cù Hữu Phú và cộng sự (2000) [13], khi tiến hành kiểm tra 53 mẫu sữa lấy từ 17 bò sữa có biểu hiện triệu chứng viêm vú lâm sàng, thì có 51 mẫu cho phản ứng d−ơng tính, chiếm tỉ lệ 96,23%. Kết quả này phù hợp với kết quả nghiên cứu của chúng tôi, vì đối t−ợng bò sữa chúng tôi tiến hành kiểm tra là những bò đk có biểu hiện bị viêm vú.
+ Kết quả kiểm tra số l−ợng tế bào trong sữa ở bò sữa bị viêm vú bằng ph−ơng pháp của Hopkirk
Để xác định mức độ viêm vú và mức độ ảnh h−ởng của bệnh đến số l−ợng tế bào ở trong sữa ngoài việc sử dụng ph−ơng pháp bằng thuốc thử CMT, chúng tôi còn tiến hành đếm số l−ợng tế bào trong sữa theo ph−ơng pháp Hopkirk.
Kiểm tra số l−ợng tế bào trong sữa ở 150 mẫu sữa bò viêm vú theo ph−ơng pháp của Hopkirk. Kết quả thu đ−ợc ở bảng 4.10:
Bảng 4.10. Kết quả đếm tế bào trong sữa ở bò sữa bị viêm vú cấp theo ph−ơng pháp Hopkirk Âm tính D−ơng tính Đợt lấy mẫu số mẫu (n) n Tỉ lệ (%) + ++ +++ ++++ n Tỉ lệ (%) I 30 0 0 6 12 12 0 30 100 II 18 0 0 6 6 6 0 18 100 III 30 0 0 6 18 6 0 30 100 IV 36 0 0 6 12 12 6 36 100 V 36 0 0 0 0 24 12 36 100 ∑ 150 0 0 24 48 60 18 150 100
Kết quả bảng 4.10 cho thấy trong 5 đợt lấy mẫu với tổng số 150 mẫu thì các mẫu đều cho kết quả d−ơng tính, trong đó: 24 mẫu sữa có kết quả d−ơng tính ở mức độ mức (+) chiếm 16,00%, có 48 mẫu có kết quả d−ơng tính ở mức độ mức (++) chiếm 32,00%, 60 mẫu có kết quả d−ơng tính ở mức độ mức (+++) chiếm 40,00% và 6 mẫu có kết quả d−ơng tính ở mức độ mức (++++) chiếm 12,00%.
Theo kết quả đếm tế bào thì ở mức độ d−ơng tính mức (++), mức (+++) chiếm tỉ lệ cao trong các mẫu, trong khi đó ở mức độ d−ơng tính mức (++++) chiếm tỉ lệ nhỏ hơn ( 12,00%).
So sánh với kết quả ph−ơng pháp dùng thuốc thử CMT thì có sự chênh lệch giữa các mẫu cho kết quả d−ơng tính mức (+) và mức (++), nếu nh− khi dùng thuốc thử CMT số mẫu cho kết quả d−ơng tính mức (+) là 20,00% và mức (++) là 28,00% thì ở ph−ơng pháp đếm tế bào mức d−ơng tính (+) giảm xuống còn 16,00% ở mức độ d−ơng tính mức (++) tăng lên 32,00%. Điều này chứng tỏ ph−ơng pháp đếm tế bào cho kết quả chính xác hơn (vì ta có thể đếm đ−ợc chính xác số l−ợng tế bào có trong 1ml sữa, ngoài ra còn cho chúng ta biết đ−ợc các tế bào có mặt trong sữa là những tế bào nào).
Qua kết quả kiểm tra số l−ợng tế bào trong sữa ở bò sữa bị viêm vú bằng ph−ơng pháp (CMT và Hopkirk) chúng tôi có nhận xét: kết quả d−ơng tính ở mức độ khác nhau biểu thị số l−ợng tế bào có mặt trong sữa tăng lên cùng với mức độ viêm vú.
+ Kiểm tra vi sinh vật có mặt trong sữa ở bò bị viêm vú
Các mẫu sữa sau khi đk đ−ợc tiến hành xác định bằng ph−ơng pháp chẩn đoán CMT, đ−ợc li tâm và cặn sữa đ−ợc tiến hành nuôi cấy phân lập vi khuẩn gây bệnh trên các môi tr−ờng phân lập. Kết quả thu đ−ợc trình bày ở bảng 4.11.
Bảng 4.11. Kết quả phân lập vi khuẩn ở sữa bò bị viêm vú cấp
Staphylococcus Streptococcus E.coli Vi khuẩn khác
Đợt lấy
mẫu số mẫu (n) Số
mẫu Tỉ lệ (%) mẫu Số Tỉ lệ (%) mẫu Số Tỉ lệ (%) mẫu Số Tỉ lệ (%)
I 10 3 30,00 3 30,00 5 50,00 1 10,00 II 6 3 50,00 4 66,66 4 66,66 0 0,00 III 10 6 60,00 3 60,00 4 40,00 1 10,00 IV 12 7 58,33 4 33,33 2 16,66 2 16,66 V 12 5 41,66 3 25,00 6 50,00 1 8,33 Tổng 50 24 48,00 17 34,00 21 42,00 5 10,00
Phân lập vi khuẩn ở 50 mẫu sữa ở bò bị viêm vú, chúng tôi thu đ−ợc kết quả ở bảng 4.11. Qua kết quả bảng 4.11 chúng tôi thấy cả 50 mẫu đều có mặt vi khuẩn. Trong đó: vi khuẩn Staphylococcus chiếm tỉ lệ cao nhất (48%).
Adams D.S. và cộng sự (1992) [21] khi tiến hành phản ứng Coagulase ở
các chủng vi khuẩn Staphylococcus phân lập từ vú bò bị viêm cho thấy
Staphylococcus aureus đk phân lập đ−ợc 60-97% trong tổng số
Staphylococcus.
Theo kết quả nghiên cứu của Nguyễn Ngọc Nhiên và cộng sự (2000)
[13], tỉ lệ những vi khuẩn gây bệnh viêm vú ở bò sữa là: Staphylococcus
- Sau vi khuẩn Staphylococcus là vi khuẩn E. Coli, chiếm tỉ lệ 42%. Anderson K.L.và cộng sự (1982) [23] khi phân lập vi khuẩn ở sữa bò bị viêm vú cho thấy, vi khuẩn E.coli chiếm 35,00% tổng số vi khuẩn phân lập.
Kết quả nghiên cứu của chúng tôi (bảng 4.11) cho thấy tỉ lệ E.coli có ở trong sữa bò bị viêm vú cao hơn so với kết quả nghiên cứu của các tác giả trên.
- Vi khuẩn Streptococcus phân lập đ−ợc ở sữa bò bị viêm vú theo kết quả nghiên cứu của chúng tôi chiếm tỉ lệ 34%.
Nguyễn Ngọc Nhiên, Cù Hữu Phú và cộng sự (2000) [13], phân lập vi khuẩn trong 198 mẫu sữa bò viêm vú thì có 187 mẫu phân lập đ−ợc vi khuẩn gây bệnh, trong đó:
- 66 mẫu phân lập đ−ợc Staphylococcus spp (33,33%). - 48 mẫu phân lập đ−ợc Streptococcus sp. (24,24%). - 32 mẫu phân lập đ−ợc Coliform (16,16%).
- Các vi khuẩn khác chiếm tỉ lệ từ 0,51ữ4,04%.
Kết quả khi phân lập vi khuẩn ở sữa bò bị viêm vú của Lê Thị Thịnh (1998) [16] cho thấy những vi khuẩn th−ờng xuyên có mặt ở sữa bò bị viêm vú là Staphylococcus (chiếm tỉ lệ 33,50%); Streptococcus (chiếm tỉ lệ 26,50%); E.coli (chiếm tỉ lệ 30,00%), các vi khuẩn khác chiếm tỉ lệ 10,00%.
Theo Viện Thú y (2002) [19], vi khuẩn gây bệnh viêm vú chính là
Staphylococcus, Streptococcus, vì các bầu vú bị nhiễm chính là bể chứa của
các vi khuẩn này cho nên sự lây nhiễm từ núm vú bị sang núm bình th−ờng chủ yếu xảy ra vào lúc vắt sữa.
Điều này giải thích cho kết quả mà chúng tôi trình bày ở trên (vì các mẫu sữa chúng tôi lấy trực tiếp ở bầu vú của những núm vú bị viêm).
Với những kết quả phân lập vi khuẩn ở trên (bảng 4.11), chúng tôi có nhận xét: trong sữa bò bị viêm vú th−ờng xuyên có mặt của 3 loại vi khuẩn Staphylococcus, Streptococcus và E. Coli. Trong đó, vi khuẩn staphylococcus chiếm tỉ lệ cao nhất, tiếp đến là vi khuẩn E. Coli và Streptococus.
Ngoài 3 loại vi khuẩn trên còn một số loại vi khuẩn khác cũng có mặt ở trong sữa bò bị viêm vú nh−ng với một tỉ lệ thấp (chiếm 10%).
D−ới đây là hình ảnh mô tả một vài loại khuẩn lạc mà chúng tôi tiến hành phân lập đ−ợc từ những mẫu sữa bò bị viêm vú.
ảnh 4.4. Khuẩn lạc Staphylococcus trong sữa bò bị viêm