methyleyelohexan trong 5 phút, lặp lại 2 lần. Rửa mẫu bằng ethanol 100” và chuyển
mẫu lần lượt qua ethanol 100), 95° 70, mỗi lần 5 phút và cuối cùng là nước cất. Sau cùng =+? Sau cùng =+?
(Lê Thị Trung, 2003).
mẫu được nhuộm bằng thuốc nhuộm hai màu (đó carmin và xanh lôU
3 -\
2.2.3. Kháo sát sự ra hoa in vữro
Khúc cắt thân và các khúc cắt hoa tự được khử trùng bằng xà phòng loãng (5%)
lạ
trong l5 phút, Javel (50%) trong 15 phút, sau đó rửa sạch lại nhiều lần bằng nước cất vô trùng và thấm khô bằng giấy thấm vô trùng. Các khúc cắt được nuôi cấy trên cất vô trùng và thấm khô bằng giấy thấm vô trùng. Các khúc cắt được nuôi cấy trên môi trường MS có bổ sung nước dừa (10%), AIA Ô,1 mg/, BA I mgil và 2,4-D 9,01; 0,1;0,5; 1 mg/L. Thí nghiệm được thực hiện ở điều kiện chiếu sáng 2500 + 500 lux,
12 giờ / ngày, độ Ẩm 60% + 5% và nhiệt độ 22°C + 2°C. Mỗi thí nghiệm được lặp
lại 3 lần, mỗi lần 5 khúc cắt. Ghi nhận tỷ lệ khúc cắt sống, quan sát sự biến đổi và phát sinh cơ quan của khúc cắt từ tuần thứ nhất đến tuần thứ năm sau khi nuôi cấy, phát sinh cơ quan của khúc cắt từ tuần thứ nhất đến tuần thứ năm sau khi nuôi cấy,
Thí nghiệm được thực hiện tại phòng thí nghiệm Sĩnh Lý Thực Vật, Trường Đại
học Sự Phạm Thành Phố Hồ Chí Minh.
2.2.4. Thí nghiệm sơ khởi về tác động cần ra hoa của các auxin
AIA, AIB và 2,4-D ở các nồng độ khác nhau được phun trực tiếp lên toần cây Mai
Dương trong tự nhiên (Ở giai đoạn 1 của sự phát triển hoa tự). Các xử lý được thực
hiện vào lúc 17 giờ 30 phút, mỗi tuần ¡ lần, trong 2 tuần. Riêng 2,4-D 10 mg/1 được
phun 1 lần. Thí nghiệm được thực hiện từ tháng tư đến cuối tháng bảy năm 2007, tại
Quận 12 và Quận Gò Vấp, Tp HCM, với 3 lần lặp lại, mỗi lần 5 cây. Sau 2 tuần đầu, giải phẫu theo dõi sự phát triển của mô phân sinh hoa. đầu, giải phẫu theo dõi sự phát triển của mô phân sinh hoa.
2.2.5. Đo cường độ quang hợp và cường độ hô hấp
è
Đo cường độ quang hợp và cường độ hồ hấp của lá trưởng thành mang chối dinh
dưỡng ở cạnh vị trí phát hoa ở cây Mai Dương trong tự nhiên tương ứng với các giai ©
hấp của khúc cất hoa tự được đo ở các giai đoạn phát triển của hoa tự và sau hai tuần xử lý 2,4-D 10 mgi.
Cường độ quang hợp và cường độ hô hấp được đo bằng máy Hansatech ở nhiệt độ 25°C, ánh sáng 2000 lux cho quang hợp hay trong tối cho hô hấp và được biểu hiện 25°C, ánh sáng 2000 lux cho quang hợp hay trong tối cho hô hấp và được biểu hiện bằng umolO;/ dm” / giờ cho lá hay nmolO2/ ø / giờ cho khúc cắt hoa tự.
2.2.6. Đo hoạt tính chất điều hòa tăng trưởng thực vật - Ly trích và phân đoạn - Ly trích và phân đoạn
Các chất điều hòa tăng trưởng thực vật được ly trích từ chổi ngọn cây Mai Dương trong tự nhiên có kích thước 2 ~ 3 cm tương ứng với các giai đoạn phát triển khác trong tự nhiên có kích thước 2 ~ 3 cm tương ứng với các giai đoạn phát triển khác nhau của cây và sau hai tuần xử lý 2,4-D 10 mg/i. NghiỀn 1 g mẫu vật tươi trong 40 mÌ metanol 80%, ngâm 24 giờ. Lọc và rửa bã lọc 2 lần với 20 ml metanol 80%. Cô cạn địch lọc, hòa với 20 mÌ nước cất. Sự trích và phân đoạn được trình bày tóm tắt trong hình 2.2.
- Sắc ký
Dùng phương pháp sắc ký trên bản mỏng Silicagel F;sa (mã số 1.0554 Merk), để
phân tách các chất điều hòa tăng trưởng thực vật, với dung môi đi chuyển là
cloroform: metanol: acid acetic (tỷ lệ theo thể tích 80:15: 5), và ở nhiệt độ 30” .
Vị trí auxin, acid abcisic và cyfokinin trên bản sắc ký được phát hiện trực tiếp dưới tia UV 254 nm so với các chất chuấn là acid indol acetic (ATIA), acid abcisic (AAB) và zeatin. Với giberelin, bản sắc ký được phun acid sunfuric: ethanol (tỷ lệ 5:95 theo thể tích), sấy ở LIOPC trong 10 phút trước khi quan sát dưới tia UV 254 nm
so với chuẩn là acid giberelie (GAs\(Yokota và cs, 1980). Hoạt tính các chất điều hòa tăng trưởng thực vật được đo ở các vị trí tương ứng với vị trí của chất chuẩn, hòa tăng trưởng thực vật được đo ở các vị trí tương ứng với vị trí của chất chuẩn,
Địch trích methanol
Cô cạn
Thêm 1Ô mì nước
Địch tan trong pH=2.5 Trích ete Simh trắc nghiệm, auxim, acid abcisic
và gibcrelin Địch nước | pH=? Trích butanol xÄ Dịch butanol Cô cạn Sinh trắc nghiệm eytokimn