* Chuẩn bị gel agarose 1,5%:
- Cân 1,5 gam agarose cho vào 100ml dung dịch TAE 1X , cho vào bình tam giác chịu nhiệt, đun sôi trong lò vi sóng cho agarose tan hết.
- Chờ gel nguội đến 60oC, lắc đều dung dịch rồi đổ vào khung đổ bản gel. Đổ gel ngập không cao quá một nửa chiều cao của thành khung đổ bản gel.
- Cắm lược cân đối và để nguội tự nhiên cho đến khi gel khô thích hợp để cho điện di. Khi gel khô thì nhẹ nhàng rút lược ra tránh làm vỡ giếng điện di.
- Chạy điện di trên thiết bị điện di:
+ Đổ khoảng 150ml TAE 1X vào bể điện di sao cho ngập bản gel, đặt bản gel vào bể diện di có đầu giếng nằm về phía cựa âm của điện trường, bản gel đặt ngay ngắn.
+ Dùng micropipette hút 15µl mẫu DNA vừa tách chiết trộn với 2µl Dye trên đĩa peptri sạch. Sau đó dùng pipep hút hỗn hợp tra vào giếng điện di.
+ Chạy điện di ở hiệu điện thế 100V trong vòng 30 phút. Quan sát sự di chuyển của DNA từ cực âm sang cực dương.
- Hiện thị kết quả điện di: ngâm bản gel 5 – 10 phút trong dung dịch ethidium bromide sau đó hiển thị kết quả diện di trên máy soi gel.
- Phân tích kết quả điện di.
+ Kết quả âm tính được xác định bằng sự không có mặt của băng DNA trên bản điện di.
+ Kết quả âm tính được xác đinh bằng sự có mặt của băng DNA sáng, rõ, đúng kích thước trên bản điện di.
Phần 4
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 4.1. Tách chiết DNA tổng số của Salmonella typhi