a) Chuẩn bị
- Tất cả dụng cụ phải được hấp sấy tiệt trùng trước khi sử dụng. - Chuẩn bị 15 g agar/1 lít để làm môi trường nuôi cấy.
- Môi trường F/2 đã được khử trùng (theo công thức trên).
- Sử dụng nước biển đã lọc để chuẩn bị môi trường F/2 (không có vitamin) hoặc có thể pha môi trường F/2 theo kiểu dung dịch gốc (không có
vitamin), sau đó bổ sung vào nước biển (đã khử trùng) theo tỷ lệ.
- Vitamin được bổ sung vào môi trường F/2 theo tỷ lệ sau khi khử trùng
(để nguội đến 450C). Cho môi trường vào ống nghiệm đã tiệt trùng, có nắp
đậy và để nghiêng, đợi cho môi trường nguội hoàn toàn. Các thao tác này
được tiến hành trong điều kiện vô trùng, tránh nhiễm khuẩn.
b) Pha môi trường agar
Pha môi trường agar 1.5% (pha 1.5 gam agar trong 100 ml nước), đun
hoà tan agar trên ngọn lửa Bunsen khi thấy agar tan hết đem hấp tiệt trùng ở
121 0C, 1 atm trong 20 phút, để nhiệt độ xuống còn 50 – 60 0C, cho vitamine vào lắc đều rồi đổ ra đĩa Petri (đã khử trùng) với thể tích agar bằng 1/3 thể tích đĩa Petri. Sau đó để nguội agar trong tủ cấy vô trùng. Mọi thao tác tiến
hành trong điều kiện vô trùng. Để 30 phút – 1h cho thạch đông lại.
c) Tiến hành cấy
Tảo giống được cấy trên môi trường F/2 có bổ sung agar (nồng độ agar
1,5%). Dùng que cấy hơ trên ngọn lửa đèn cồn, đợi cho que cấy nguội, lấy
nuôi giữ trong điều kiện ánh sáng 1500 lux với chu kỳ chiếu sáng là 10h:14h, nhiệt độ 18oC. Sau 7 - 10 ngày, tảo mọc trên mặt thạch. Kiểm tra các quần lạc
tảo thuần khiết, chọn ống nghiệm hoặc đĩa thạch nào có khuẩn lạc tảo lên đẹp
sau để lưu giữ trong tủ lạnh ở nhiệt độ 4 – 5oC, hạn chế ánh sáng [9].