enzyme cellulase
Nhiệt độ Tiến hành
Nuôi cấy chủng vi khuẩn Bacillus tuyển chọn ở môi trường lỏng thu enzyme: cao nấm 2,5%, peptone 5%, CMC 1% trong 48h trên máy lắc 180 vòng/phút ở nhiệt độ phòng. Sau đó đem ly tâm lạnh ở 8000 vòng/15 phút để thu dịch enzyme. Ủ enzyme với cơ chất CMC ở các nhiệt độ khác nhau 300C, 400C, 500C, 600C trong 1 giờ. Làm tương tự với mẫu đã bất hoạt enzyme ở các nhiệt độ khác nhau. Đem đo quang ΔOD 540nm các mẫu thí nghiệm.
Làm 3 ống không bất hoạt enzyme và 3 ống đã bất hoạt enzyme ở các nhiệt độ khác nhau để so sánh hoạt tính của enzyme cellulase.
pH
Tiến hành
Nuôi chủng vi khuẩn Bacillus tuyển chọn ở môi trường lỏng thu enzyme: cao nấm 2,5%, peptone 5%, CMC 1% trong 48h trên máy lắc 180 vòng/phút ở nhiệt độ phòng. Sau đó đem ly tâm lạnh ở 8000 vòng/15 phút để thu dịch enzyme. Ủ enzyme với cơ chất CMC ở các pH khác nhau pH = 5, 6, 7, 8, 9 trong 1 giờ. Làm tương tự với mẫu đã bất hoạt enzyme ở pH khác nhau. Đem đo quang ΔOD 540nm các mẫu thí nghiệm.
Làm 3 ống không bất hoạt enzyme và 3 ống đã bất hoạt enzyme ở các pH khác nhau để so sánh hoạt tính của enzyme cellulase.
Hình 2.3: Sơ đồ xác định các điều kiện ảnh hưởng đến hoạt tính enzyme cellulase. Nuôi cấy Bacillus
tuyển chọn
Sinh khối vi khuẩn + dịch Enzyme Cellulase
Dịch Enzyme Cellulase thô
Mẫu bất hoạt Cơ chất CMC Xác định hoạt độ Cellulase Lắc 180 vòng/48h Ly tâm 8000 vòng/15 phút Đo ∆OD 540nm Nhiệt độ (0C) 30, 40, 50, 60 pH 5, 6, 7, 8, 9 Mẫu không bất hoạt