Từ dung dịch chuẩn gốc Carbaryl và Dimethoate 1000 ppm pha sẵn, tiến hành pha lỗng bằng nước được dung dịch cĩ nồng độ10 ppm của Carbaryl và Dimethoate trong nước.
Chuẩn bị pha động khảo sát: ở đây chúng ta tiến hành khảo sát khả năng tách Carbaryl và Dimethoate của các pha động cĩ thành phần Axetonitril và nước theo những tỉ lệ 85/15, 70/30, 55/45, 40/60.
Tiến hành pha các pha động với tỉ lệ về thể tích Axetonitril: nước = 85/15, 70/30, 55/45, 40/60. Ứng với mỗi pha động này ta thực hiện phân tích cho cả Carbaryl và Dimethoate ở nồng độ 10 ppm đã pha ở trên. Mỗi pha động khi phân tích với từng chất sẽ cho số liệu về thời gian lưu và diện tích peak tương ứng.
3.5. Xây dựng các đường chuẩn của các chất phân tích
Chuẩn bị các dung dịch chuẩn Carbaryl, Dimethoate, Vitamin C với các nồng độ 1, 2, 5, 10, 20 ppm bằng cách pha lỗng ra từ dung dịch chuẩn gốc 1000 ppm.
Pha động chọn để xây dựng đường chuẩn dựa vào kết quả của thí nghiệm mục 3.4. Đối với Carbaryl và Dimethoate chọn pha động là Axetonitril: nước theo tỉ lệ thể tích 55: 45. Cịn đối với pha động phân tích Vitamin C sử dụng là methanol: hệ đệm KH2PO4 cĩ pH = 2,8 theo thể tích 10 : 90.
Hệ đệm được pha bằng cách hồ tan 6,5g KH2PO4 trong 1l nước cất 2 lần, chỉnh pH về 2,8 bằng H3PO4 rồi lọc bằng màng 0,45µm.
Tiến hành đo các dung dịch Carbaryl và Dimethoate trên máy sắc ký với các thơng số như mục 3.3 trên. Mỗi mẫu chuẩn phân tích 3 lần, lấy giá trị trung bình của diện tích peak. Thiết lập đường chuẩn phụ thuộc của diện tích peak thu được vào nồng độ chất phân tích trong dung dịch mẫu chuẩn.
3.6. Xác định độ thu hồi mẫu qua cột của mỗi chất ứng với điều kiện chọn phântích. tích.
Để xác định độ thu hồi mẫu cùa các chất qua cột phân tích ta tiến hành phân tích ớ các nồng độ từ 1 đến 20 ppm.
Ở chế độ cĩ đi qua cột: mỗi nồng độ phân tích 3 lần theo chế độ ứng với chất đã nêu ở trên, tính diện tích peak trung bình (Xc).
Ở chế độ khơng cho qua cột: cứ khoảng 1 phút ta tiêm mẫu vào cột một lần với thể tích 20 µl, sau 5 -6 phút thì dừng (các lần bơm từ lần 2 trở đi khơng nhấn phím START). Tính giá trị trung bình của diện tích peak ở mỗi nồng độ (X0).
Giá trị hiệu suất thu hồi qua cột Hc(%) được tính theo cơng thức: Hc(%) = X Xc 0 100 [Cơng thức 1]
3.7. Khảo sát các bậc trích ly Carbaryl, Dimethoate và xác định hiệu suất thu hồi qua các bậc.