Trang 25
Chương 1 — 1t Ống quan tài liệu Luận văn Thạc sĩ Sinh học
+ ELISA kháng thể trực tiếp
Nguyên tắc của dạng này tương tự như dạng ELISA kháng nguyên trực
tiếp. Kháng thể được cố định trên pha rắn và kháng nguyên cộng hợp được bổ
sung để phát hiện sự có mặt của kháng thể chuyên biệt với kháng nguyên.
|EADuz + Ag.E —— ]EAbu — Ag.E
+ ELISA kháng nguyên cạnh tranh
Dạng này nhằm phát hiện và định lượng kháng nguyên. Kháng thể được cố định trên giếng. Kháng nguyên tự do trong mẫu thử sẽ cạnh tranh với kháng cố định trên giếng. Kháng nguyên tự do trong mẫu thử sẽ cạnh tranh với kháng
nguyên chuẩn cộng hợp trong tương tác với kháng thể. Định lượng kháng nguyên tự do bằng cách dựa vào đường cong của kháng nguyên chuẩn cạnh tranh.
]EAb + AØchuẩn-E ——> ]EAb — ABchuẩn.E
ABchuẩn.E ]EAb — Agcnuẩn.E
= - —>
JEab+ le ]=Ab - Ag
+ ELISA sandwich
Dạng này nhằm phát hiện và định lượng kháng nguyên. Kháng nguyên
mẫu thử được “kẹp“ giữa kháng thể cố định và kháng thể cộng hợp tại các
epItope chuyên biệt và được định lượng thông qua đường cong kháng nguyên chuẩn. Phương pháp này dựa vào đặc điểm đa epitope của kháng nguyên, các epitope này có thể khác nhau hoặc cùng loại nhưng có độ lặp lại trên kháng nguyên nền tính chuyên biệt và độ nhạy của phương pháp tăng.
]EAb + ABmứ —> ]EAb — Aðthử + Aby.E (Abx.E)
—* ]=Abx — ABPtuhửứ — Aby.E (Abx.E)
Chương 1 ~ Tổng quan lài liệu Luận văn Thạc sĩ Sinh học Với mục đích phát hiện sự hiện điện của kháng nguyên và phát hiện
chuyên biệt kháng thể hiện điện trong kháng huyết thanh, dạng ELISA kháng
nguyên/kháng thể gián tiếp đã được chọn để sử dụng trong luận văn này. Dạng ELISA này giúp thu kết quả có độ nhạy cao so với dạng ELISA kháng nguyên trực tiếp và thao tác đơn giản so với các đạng ELISA khác.
Luận văn Thạc sĩ Sinh học
Chương 2 ~ Vật liệu và phương pháp Luận văn Thạc sĩ Sinh học
2.1. Vật liệu
2.1.1. Thiết bị
~ Muitipipete
— Đĩa ELISA 96 giếng
Micropipette các loại
Đầu típ các loại
Tube
Máy ELISA multiskan (Phần Lan) Autoclave (SS325 - TOMY)
Bộ điện di DNA (HORIZONẺS8, Life Technologyru. Mỹ) và hộp đèn soi
UV (Hoefer, Mỹ)
Bộ điện di protein và bộ nguồn (Biorad, Mỹ)
Bộ điện chuyển màng lai (Hoefer mini VE, Amersham Pharmacia Biotech)
Cân phần tích Precica (Thụy Sỹ)
Cân kỹ thuật Ohaus (Mỹ)
Máy điện biến nạp, tạo xung điện dùng để biến nạp DNA plasmid vào tế bào vị sinh vật (Biorad, Mỹ)
Máy ly tâm lạnh siêu tốc (Heraeus, Đức)
Máy ly tâm lạnh Mikro 22R (Hetich, Đức)
Máy đo quang phổ chuyên dụng dùng đo ĐNA, RNA và protein (Amersham Biosciences)
Máy PCR (Perkm —- Elmer)
Máy lắc ổn nhiệt Orbital Incubator S150 (Stuard Scientfc, Anh) Máy chụp hình gel (Amersham Biosciences)
Máy phá màng tế bào bằng sóng siêu âm (Ultrasonic Cell Disruptor, Mỹ) Máy Vortex (KA, Mỹ)
Chương 2 ~ Vi liệu và phương pháp +Luận văn Thạc sĩ Sinh học Máy đo pH (ORION, Anh)
Máy khuấy từ gia nhiệt Bibby (Anh) Tú sấy Mermamert (Đức) Tú sấy Mermamert (Đức)
Tủ cấy vô trùng Class II (Mỹ)
Tủ lạnh —- 20C (Medical Class, Nhật)
Tủ lạnh - 802C (MDF 382 - SANYO, Nhật)
Tủ mát 4— 10°C (Nhập 2.1.2. Hóa chất 2.1.2. Hóa chất
Các hóa chất được sử dụng trong luận văn này được sản xuất bởổi công ty “ Fermentas, Amersham, Toyobo.