b ằng phương pháp khuếch tán trên thạ ch
3.2.9. Phương pháp xác định các yếu tố ảnh hưởng của MT đến
* Ảnh hưởng thời gian
Để xác định ảnh hưởng thời gian ta nuôi 3 chủng nấm sợi trên MT xốp cơ sởở
các thời gian khác nhau 1 ngày, 2 ngày, 3 ngày, 4 ngày, 5 ngày. Sau khi nuôi cấy, ly trích enzym và xác định hoạt độ cellulase theo phương pháp định lượng đường khử
bằng 3,5- dinitrosalycylic.
Bố trí thí nghiệm với 3 lần lặp lại.
* Ảnh hưởng nguồn cacbon
Để xác định ảnh hưởng các nguồn cacbon khác nhau đóng vai trò là chất cảm
ứng đến khả năng sinh tổng hợp enzym cellulase, ta tiến hành nuôi các chủng nấm sợi trên MT bán rắn với tỉ lệ cacbon khác nhau như sau:
- 4 cám: 6trấu (4C:6T) - 6 cám : 4 rơm (6C:4R). - 4 rơm : 6 cám (4R: 6C) - 100% rơm (1R) Bố trí thí nghiệm với 3 lần lặp lại. Mẫu đối chứng là MT xốp cơ sở. * Ảnh hưởng pH
Để xác định ảnh hưởng pH đến quá trình sinh tổng hợp enzym cellulase của các chủng nấm sợi nghiên cứu, tiến hành nuôi trên MT sinh enzym cao nhất được chọn ở thí nghiệm trên, dùng HCl 5%, NaOH 5% điều chỉnh pH MT về các độ pH 4, 5, 6, 7, 8.
Bố trí thí nghiệm với 3 lần lặp lại. Mẫu đối chứng là MT xốp cơ sở, pH5,5.
* Ảnh hưởng độẩm
Để xác định ảnh hưởng độ ẩm đến sinh tổng hợp enzym cellulase ta cũng nuôi trên MT có nguồn cacbon và pH tốt nhất ở 2 thí nghiệm trên, điều chỉnh độ ẩm bằng nước biển vô trùng về các độẩm 50%, 55%, 60%, 65%, 70%.
Bố trí thí nghiệm với 3 lần lặp lại. Mẫu đối chứng là MT xốp cơ sở, độẩm 60
* Ảnh hưởng nhiệt độ
Để xác định ảnh hưởng của nhiệt độ ta cũng nuôi trên MT có nguồn cacbon, pH, độẩm tốt nhất ở 3 thí nghiệm trên và ủở các nhiệt độ khác nhau 250C, 300C, 500C, 550C.
Bố trí thí nghiệm với 3 lần lặp lại. Mẫu đối chứng là MT xốp cơ sở, nhiệt độ
phòng.
Ly trích enzym cellulase và đánh giá khả năng sinh enzym cellulase theo phương pháp định lượng đường khử bằng 3,5- Dinitrosalycylic acid.