2. Bệnh và cách phòng trị
2.2. Bệnh Monodon Type baculovirus (MBV) ở tôm he
2.2.1. Tác nhân gây bệnh
Gây bệnh MBV là Baculovirus, một virus dạng hình que, có acid nucleic là DNA, thuộc nhóm có thể ẩn (Occlusion body). Hiện nay đã có 2 chủng
virus này được nghiên cứu và mô tả: MBV từ tôm P. monodon vùng Thái Bình Dương, có cấu trúc chính (Nucleo-capsid): 42 ± 3nm x 246 ± 15nm và vi thể virus (virion): 75±4nm x 324±33nm. Một chủng khác có tên PmSNPV được phân lập từ P. monodon, P. plebelus, P. merguiensis ở Úc có cấu trúc chính (Nucleo-capsid): 15–32 x 260–300nm và vi thể virus (virion) có kích thước là 60 x 420nm. Cơ quan đích của vius này khi ký sinh trên tôm he là nhân tế bào gan tụy của tôm.
2.2.2. Dấu hiệu chính của bệnh
Bệnh xảy ra ở Postlarvae: Khi nhiễm nhẹ không có dấu hiệu rõ ràng, khi nhiễm nặng thường thể hiện một số dấu hiệu như: yếu, bơi lội lờ đờ, cơ thể đổi màu xanh lơ hay xanh đen, sinh trưởng chậm, chuyển giai đọan chậm không đều. Tỷ lệ chết có thể tích lũy đến 90% nếu môi trường không ổn định. Trong thực tế, do điều kiện môi trường bể ấp được quản lí chặt chẽ và ổn định, nên có nhiều đàn nhiễm rất nặng, tỷ lệ nhiễm tới 100%, nhưng chưa chết hoặc chỉ chết rải rác. Những đàn tôm này khi thả ra ao nuôi, môi trường có sự biến động lớn so với trong bể ấp, gây tỷ lệ hao hụt lớn trong những tuần đầu thả giống.
Mẫu ép mô gan tụy tươi, với thuốc nhuộm Malachite Green, cho thấy nhiều nhân tế bào gan tụy bị phình to, thể tích có thể tăng gấp 6 lần so với nhân tế bào không bị nhiễm virus. Trong nhân tế bào phình to, thường chứa bên trong từ 2 đến nhiều thể ẩn (Occlusion bodies) hình cầu, nhiều mô ở ống gan tụy bị phá hủy, liên kết giữa các tế bào trong biểu mô gan tụy không còn được duy trì.
Tôm thịt khi bị nhiễm MBV thường có mầu đen tối, kém ăn, còi cọc, chậm lớn, chu kì lột xác kéo dài, nên trên mang và bề mặt cơ thể bị cảm nhiễm rất nhiều các tác nhân cơ hội như vi khuẩn dạng sợi, động vật đơn bào (Protozoa), tảo đơn hay đa bào và các tác nhân khác. Có thể sau 3–4 tháng nuôi, tôm vẫn có kích thước rất nhỏ "tôm kim". Ngoài ra, nhiều tác giả còn
cho rằng MBV có thể làm cơ thể tôm yếu đi và mẫm cảm hơn với các mầm bệnh nguy hiểm khác như vi khuẩn Vibrio, virus đốm trắng, gây tỷ lệ chết cao trong quần đàn.
Tôm sú bố mẹ cũng có thể bị nhiễm virus MBV, nhưng tác hại trên tôm mẹ không rõ ràng. Nhìn hình thức bên ngoài rất khó xác định tôm mẹ có nhiễm MBV hay không, nên nguy cơ đưa tôm mẹ có MBV (+) vào tham gia sinh sản nhân tạo trong các trại giống là rất cao. Các con tôm mẹ có MBV (+), chắc chắn sẽ tạo ra những đàn postlarrvae bị dương tính với MBV. Mức độ nhiễm MBV nặng hay nhẹ của tôm mẹ có quan hệ chặt chẽ với mức độ nhiễm cao hay thấp ở đàn tôm ấu trùng (Đỗ Thị Hòa, 2000).
Kết quả nghiên cứu mô bệnh học của tôm sú khi nhiễm MBV cho thấy một số thể ẩn hình cầu, bắt màu hồng của eosin, nằm trong nhân tế bào biểu mô gan tụy đã bị phình to. Ở những đàn tôm bị nhiễm nặng, trong mỗi nhân tế bào bị phình to có chứa hàng chục thể ẩn và có một tỷ lệ lớn những nhân tế bào có chứa thể vùi. Đây chính là các căn cứ để đánh giá mức độ nhiễm nặng hay nhẹ ở một mẫu tôm nghiên cứu.
Kết quả nghiên cứu ở Việt Nam cho thấy, tại các tỉnh miền Trung có khoảng 70% bể Post có MBV(+). Khi đưa Post xuống ao đất để ương thành tôm giống, tỷ lệ nhiễm MBV trên đàn giống tăng cao, gần 90% ao ương nhiễm MBV. Tôm bố mẹ dùng trong các trại sản xuất tôm sú giống ở miền Trung bị nhiễm MBV từ 60 – 70% ( Đỗ Thị Hòa, 2000).
C D
E F
Hình 14: Tôm sú (Penaeus monodon) bị bệnh MBV và các đặc điểm mô bệnh học;
A: Tôm 2 tháng tuổi bị nhiễm MBV nặng thể hiện sự phân đàn, còi và có mầu tối; B: Mô học gan tụy của tôm khỏe không nhiểm MBV, các nhân tế bào nhỏ, đều và rõ ràng; C và D: Lát cắt mô gan tụy tôm sú bị nhiễm MBV với cường độ cao, thể hiện các thể ẩn hình cầu, có màu hồng của Eosin; E: thể ẩn hình cầu của MBV ở độ phóng đại cao; F: Mẫu gan tụy ép tươi có nhuộm MG cho thấy các thể ẩn (occlusion bodies) ít bắt mầu thuốc nhuộm
Khi nghiên cứu về đặc điểm lan truyền của MBV, Paynter và nhiều tác giả khác đã khẳng định rằng: Virus này có thể lây nhiễm theo 2 trục, trục dọc và trục ngang. Tôm mẹ mang virus, khi tham gia sinh sản, MBV theo phân tôm mẹ vào môi trường bể đẻ, bể ấp, chúng sẽ xâm nhập vào cơ thể ấu trùng tôm qua con đường thức ăn, bắt đầu từ giai đọan Zoea, khi ấu trùng sử dụng thức ăn từ bên ngoài. Ngoài ra, MBV cũng lây nhiễm theo trục ngang rất mạnh. Liao và ctv thông báo rằng, MBV có thể nằm trong các thể ẩn (occlusion bodies), theo phân tôm bị nhiễm, ra ngoài môi trường, nằm ở đáy ao trong nhiều năm và là nguồn lây nhiễm cho tôm khỏe theo trục ngang.
Một số công trình nghiên cứu về khả năng chịu đựng của MBV với các điều kiện môi trường và thuốc sát trùng cho thấy: MBV có khả năng chịu đựng cao với thuốc sát trùng: với Iodine 15ppm, Chlorine 10 ppm virus vẫn tồn tại trong 6 –8h; có thể sống ở S%o = 0%o và t0 = 370C, nhưng lại kém chịu đựng với ánh sáng mặt trời, MBV sẽ mất khả năng cảm nhiễm sau 6 –8 h dưới cường độ ánh sáng mặt trời ở mức độ trung bình. (Natividad,1992).
Mức độ cảm nhiễm MBV trên hậu ấu trùng quan hệ không chặt với các tháng, các mùa vụ khác nhau trong năm. Đàn Post thường xuyên mang mầm bệnh, bệnh có xảy ra được hay không chịu ảnh hưởng lớn vào điều kiện gây sốc do mật độ cao, môi trường biến động...
2.2.3. Phương pháp chẩn đoán
Có thể chẩn đoán sơ bộ bệnh MBV thông qua các dấu hiệu chính của bệnh như đã mô tả ở phần trên. Có thể áp dụng phương pháp kiểm tra nhanh các mẫu mô gan tụy ép tươi không nhuộm hay có nhuộm bằng malachite green, dưới kính hiển vi ở độ phóng đại ≥400x. Dưới kính hiển vi, có thể nhận biết sự hiển diện của virus này thông qua sự tồn tại của các thể ẩn (occlusion bodies) hình cầu, ít bắt mầu thuốc nhuộm, nằm trong các nhân phình to của tế bào biểu mô gan tụy
Có thể dùng phương pháp mô học, để phát hiện các thể ẩn hình cầu, bắt màu hồng của thuốc nhuộm Eosin, nằm trong nhân phình to của tế bào gan tụy, trên các lát cắt mô gan tụy với thuốc nhuộm H và E, ở độ phóng đại ≥ 400X .
Ngoài ra cũng có thể dùng các phương pháp hiện đại để chẩn đoán và nghiên cứu virus này như dùng kỹ thuật PCR để nhận biết ADN đặc trưng của MBV, dùng phương pháp kính hiển vi điện tử (TEM) phát hiện các vi thể virus MBV trong nhân tế bào biểu mô gan tụy…
2.2.4. Phương pháp phòng bệnh
Trong các trại sản xuất tôm giống, để có các đàn Postlarvae của tôm sú có chất lượng cao, không hay ít nhiễm MBV cần quan tâm đến các biện pháp kĩ thuật sau: Kiểm tra phân để chọn tôm mẹ không hoặc ít nhiễm MBV; Dùng kĩ thuật rửa nauplius, hay rửa trứng bằng hóa chất như: Formol 100 - 200ppm trong 30 giây-1phút; Iodine 1-2ppm trong 1-2 phút hoặc rửa bằng nước biển sạch trong 3-5 phút, để ngăn cản quá trình lây nhiễm virus từ mẹ sang con. Không nên nhốt chung tôm mẹ từ các nguồn khác nhau vào một dụng cụ vì khả năng lây nhiễm rất nhanh theo trục ngang của MBV. Nước và dụng cụ cần được sử lý kỹ trước khi dùng, không nên dùng chung dụng cụ giữa các bể ấp. Không nên ương ấp mật độ quá dày và nên hủy bỏ những đàn postlarvae bị nhiễm MBV nặng.
Để phòng bệnh cho tôm thịt cần lựa chọn một đàn giống không, hoặc ít nhiễm MBV bằng các phương pháp kiểm tra nhanh như đã mô tả ở phần trên. Cũng có thể áp dụng biện pháp sốc Formol 100-200ppm, trong 30 giây- 1 phút, để lựa chọn một đàn giống khỏe, ít nhiễm MBV, hoặc sốc để loại bỏ bớt những con mang mầm bệnh, trước khi thả giống xuống ao nuôi thương phẩm. Tẩy ao cẩn thận trước một chu kì nuôi: vét hết chất thải của đợt sản xuất trước, phơi nắng đáy ao (nếu có thể), sát trùng đáy ao bằng vôi và hóa chất để tiêu diệt MBV tồn tại ở đáy ao. Không nên nuôi mật độ quá cao, chỉ 25 – 30
con/m2, vì theo nghiên cứu của 1 số tác giả, nếu đàn giống có nhiễm MBV, được nuôi ở mật độ thấp thì ảnh hưởng của nó đến sinh trưởng của tôm sẽ giảm. Quản lí môi trường ao nuôi thích hợp và ổn định cũng là biện pháp có hiệu quả để phòng bệnh này.