- Thermonuclease cụa S aureus: cũng như tât cạ các vi sinh vaơt khác S aureus đeău có theơ toơng hợp DNAse ngối bào, như có đieơm khác bieơt so với tât cạ các loài vi sinh vaơt khác,
1. Phương pháp phát quang sinh hĩc ATP
Phađn tử Adenosine triphosphate (ATP) có maịt trong tât cạ các tê bào sông, neđn sự phát hieơn ATP là dâu hieơu đeơ nhaơn biêt vaơt chât sông đang toăn tái. ATP có theơ được phát hieơn và định lượng thođng qua cường đoơ ánh sáng phát ra do sự kêt hợp với enzyme Luciferase. Kĩ thuaơt này có theơ phát hieơn được 1pg ATP, tương ứng với khoạng 1000 tê bào vi khuaơn (10-15g ATP/ tê bào). Quá trình phađn tích chư dieên ra trong vài phút và vì thê phương pháp này được xem là nhanh hơn và thuaơn lợi hơn so với phương pháp đêm khuaơn lác.
Vieơc dùng phương pháp đo hàm lượng ATP đeơ xác định rõ sô vi sinh vaơt đang hieơn dieơn đã được biêt đên vào naím 1960. Tuy nhieđn, phương pháp này đòi hỏi nhieău sự cại tiên trong vieơc thiêt kê thiêt bị đo cường đoơ ánh sáng phát ra và những hóa chât đeơ oơn định sự phát sáng. Ngày nay phương pháp này được ứng dúng trong 3 lĩnh vực: giám sát veơ sinh, kieơm tra những lối chât lỏng như nước rửa làm sách heơ thông, đánh giá chât lượng vi sinh cụa thực phaơm. Đeơ đánh giá chât lượng vi sinh cụa thực phaơm thì lượng ATP cụa vi sinh vaơt phại được đo và đieău này đòi hỏi những quy trình tách chiêt ATP ra khỏi tê bào vi sinh vaơt.
Phạn ứng phát sáng sinh hĩc trại qua hai giai đốn :
E + LH2 + ATP E – LH2 AMP + PPi (1)
E – LH2 AMP +O2 Oxyluciferin + AMP + CO2 + hv (2)
Phạn ứng phát sáng sinh hĩc ở đom đóm có theơ viêt lái như sau:
E + LH2 + ATP +O2 Oxyluciferin + AMP + CO2 + hv +PPi
E : luciferase LH2 :luciferin
Aùnh sáng phát ra có bước sóng 562nm, có màu vàng.
Mg2+
http://www.ebook.edu.vn 40
người thực hieơn quét mău tređn moơt vị trí (thường là 10cm2), sau đó nhúng hoàn toàn que quét mău vào trong dung dịch chứa những tác nhađn làm phóng thích ATP, troơn với dung dịch luciferase – luciferin và đaịt vào trong moơt cuvette đeơ đĩc trị sô ánh sáng.
Sơ đoă các bước định lượng nhanh vi sinh vaơt hieơn dieơn tređn beă maịt baỉng phạn ứng phát sáng