3. Đối t−ợng, địa điểm, nội dung và ph−ơng pháp nghiên cứu
3.3.Nội dung nghiên cứu
“Nghiên cứu tẩy sạch virus bằng kỹ thuật nuôi cấy meristem nhằm phục
tráng giống khoai tây KT2”
Phần I: Điều tra ngoài sản xuất
Thí nghiệm 1: Điều tra thực tế và đánh giá tình hình sản xuất giống
Điều tra: điều tra ngoài ruộng sản xuất kết hợp với thu thập số liệu tại phòng nông nghiệp huyện Quế Võ và phòng trồng trọt sở nông nghiệp tỉnh Bắc Ninh.
- Điều tra tình hình sản xuất và năng suất, phẩm chất của khoai tây KT2 ở Quế Võ - Bắc Ninh.
- Đánh giá độ nhiễm bệnh virus của giống khoai tây KT2 bằng quan sát triệu chứng trên đồng ruộng.
Thí nghiệm 2: Đánh giá độ nhiễm bệnh virus của giống KT2 bằng ph−ơng pháp Test Elisa.
Phần II: Nghiên cứu làm sạch virus
Thí nghiệm 3: Xác định kích th−ớc thích hợp cho tái sinh cây từ meristem
Thí nghiệm đ−ợc tiến hành trên môi tr−ờng MS + 2,5% đ−ờng sacaroza + 6,0g agar/l + 0,01ppm kinetin + 3ppm GA3 với meristem tách ở các kích th−ớc 0,1mm, 0,2mm, 0,3mm, 0,4mm, 0,5mm, 0,6mm.
Thí nghiệm 4: Xác định môi tr−ờng thích hợp cho tái sinh cây từ meristem Công thức thí nghiệm Đ/C: MS + 25%sacaroza+ 6,5g/l agar CT1:Đ/C + 0,01ppm kinetin + 1ppm GA3 CT2:Đ/C + 0,01ppm kinetin + 2ppm GA3 CT3:Đ/C + 0,01ppm kinetin + 3ppm GA3 CT4:Đ/C + 0,01ppm kinetin + 4ppm GA3.
Thí nghiệm 5: ảnh h−ởng của l−ợng Agar đến khả năng tái sinh cây từ Meristem
Công thức thí nghiệm:
Đ/C: MS + 5g agar/l + 3ppmGA3+ 25%sacaroza +0,1ppm kinetin CT1:Đ/C với 5,5g agar/l
CT2:Đ/C với 6g agar/l CT3:Đ/C với 6,5g agar/l
Thí nghiệm 6: Xác định ảnh h−ởng của xử lý nhiệt kết hợp nuôi cấy
meristem đến quá trình làm sạch virus (Xử lý nhiệt độ cây mẹ tr−ớc khi
tách meristem ở 37oc)
Đ/C: Không xử lý nhiệt CT1: Xử lý 2 tuần CT2: Xử lý 3 tuần CT3: Xử lý 4 tuần
Chúng tôi tiến hành xử lý nhiệt cây mẫu tr−ớc khi tách meristem trong tủ định ôn có chiếu sáng. Sau đó tách meristem ở các kích th−ớc 0,6mm, 0,5mm, 0,4mm, nuôi cấy trên môi tr−ờng MS + 5,5g agar/l + 3ppm GA3+ 25%sacaroza +0,1ppm kinetin.
Phần III: Đánh giá sự sinh tr−ởng của cây sạch virus trong in vitro
Thí nghiệm 7: Đánh giá sự sinh tr−ởng , phát triển của cây khoai tây KT2 sạch trong nuôi cấy in vitro.
Công thức thí nghiệm:
CT2: Cây sạch virus Y CT3: Cây sạch virus X+Y
Thí nghiệm 8: Đánh giá tạo củ in vitro khoai tây KT2 sạch bệnh
Công thức thí nghiệm:
CT1(đ/c): Cây bị bệnh virus X + Y CT2: Cây sạch virus Y
CT3: Cây sạch virus X+Y
Toàn bộ thí nghiệm 7 sau 3 tuần chuyển sang môi tr−ờng tạo củ. Thí nghiệm 9: Trồng thử nghiệm ngoài sản xuất
CT1: Cây bị bệnh virus X + Y CT2: Cây sạch virus X+Y (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});