Chúng tôi sử dụng các chất bổ trợ: ISA và IMS của hãng Septic, Al(OH)3 và alum của SPI Pharma. Mỗi chất bổ trợ được bổ sung vào dịch nuôi chứa độc tố đã được bất hoạt và giải độc (gọi là tắt là kháng nguyên) với tỷ lệ thích hợp. Trước tiên chúng tôi tiến hành thử an toàn trên động vật thí nghiệm là chuột bạch 18 – 20 gam. Kết quả thu được trình bày ở bảng 20.
Bảng 20: Tính an toàn của kháng nguyên có chứa các chất bổ trợ khác nhau Kháng nguyên có
chất bổ trợ
Tỷ lệ chuột chết/tiêm theo đường tiêm
Dưới da (1 ml) Phúc xoang (0,5)
Nhũ hóa ISA 6/10 7/10 Không đạt
Nhũ hóa IMS 4/10 4/10 Không đạt
AL(OH)3 0/10 0/10 Đạt
Alum 0/10 0/10 Đạt
Từ kết quả thử an toàn, chúng tôi nhận thấy 2 sản phẩm có bổ trợ Al(OH)3 và alum khi bổ sung vào kháng nguyên E. coli an toàn hơn so với sản phẩm có bổ trợ dầu khoáng ISA, IMS. Từ đây chúng tôi sử dụng 2 sản phẩm này để tiếp tục nghiên cứu hiệu lực trên động vật thí nghiệm là chuột bạch.
Chúng tôi tiếp tục nghiên cứu hiệu lực của hai sản phẩm trên bằng cách miễn dịch liều 0,4ml/con theo đường tiêm dưới da trên chuột bạch và so sánh với đối chứng (đối chứng là chuột miễn dịch kháng nguyên không có chất bổ trợ). Sau khi tiêm 21 ngày, tiến hành lấy máu chuột, chắt huyết thanh, kiểm tra hiệu giá kháng thể bằng phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kính. Kết quả cụ thể như sau:
Bảng 21: Kiểm tra tính miễn dịch của kháng nguyên có bổ sung các chất bổ trợ Chất bổ
trợ Nồng độ Hiệu giá từng con Hiệu giá trung bình Al(OH)3 10/00 1/128 1/64 1/128 1/128 1/128 1/115,2
30/00 1/128 1/256 1/128 1/256 1/128 1/179,2 40/00 1/128 1/256 1/128 1/256 1/64 1/166,4 Alum 0.50/00 1/128 1/64 1/128 1/128 1/64 1/102,4 10/00 1/256 1/128 1/128 1/256 1/128 1/179,2 20/00 1/128 1/512 1/128 1/256 1/128 1/230,4 30/00 1/128 1/256 1/128 1/256 1/64 1/166,4 Đối chứng (không có chất bổ trợ) 1/128 1/64 1/64 1/128 1/128 1/102,4
Nhìn chung chuột được miễn dịch bằng kháng nguyên có chất bổ trợ có hiệu giá kháng thể cao hơn so chuột đối chứng, cụ thể:
Đối với chất bổ trợ là Al(OH)3 ở mỗi nồng độ khác nhau thì gây ra đáp ứng miễn dịch khác nhau trên động vật thí nghiệm. Trong đó nồng độ 20/00 cho kết quả tốt nhất thể hiện qua hiệu giá kháng thể của huyết thanh chuột là cao nhất (hiệu giá trung bình đạt 1/204,8). Nồng độ tối ưu của chất bổ trợ alum cũng là 20/00 (hiệu giá trung bình đạt 1/230,4).
Từ những kết quả trên, chúng tôi quyết định chọn alum bổ sung với nồng độ 2 0/00 làm chất bổ trợ cho kháng nguyên và sử dụng cho những nghiên cứu tiếp theo.