- Hỳt 1 ml nước thải vào ống nghiệm thứ nhất cú chứa 9 ml nước cất vụ khuẩn.
- Trộn đều dung dịch bằng cỏch hỳt lờn rồi thổi xuống 3 - 5 lần. Độ pha loóng mẫu lỳc này là 10-
1.
- Tiếp tục hỳt 1 ml ởống nghiệm thứ nhất cho vào ống nghiệm thứ hai chứa 9 ml nước cất vụ khuẩn.
- Trộn đều như trờn. Độ pha loóng mẫu lỳc này là 10-2.
- Cứ tiếp tục như vậy để cú mẫu ở cỏc độ pha loóng 10-3, 10-4, 10-5, 10-6,…
Tựy theo nồng độ vi sinh vật ước đoỏn trong mẫu mà tiến hành pha loóng mẫu với cỏc tỉ lệ khỏc nhau.
b. Cỏch tiến hành
- Chuẩn bị mụi trường thạch đĩa: mụi trường MPA, Czapek, Hansen được khử trựng ở 1 atm trong 30 phỳt, đổ vào cỏc đĩa petri vụ trựng, chờ thạch đụng và khụ mặt thạch.
- Ghi vào đỏy đĩa petri cú mụi trường thạch thớch hợp với từng loại vi sinh vật cỏc thụng tin: + Nồng độ pha loóng
+ Ngày cấy
- Dựng pipetman gắn đầu cụn vụ trựng lấy từ cỏc độ pha loóng thớch hợp nhỏ vào mỗi đĩa petri 0,1 ml (tương đương với 2 giọt dịch ), mỗi độ pha loóng được lặp lại 3 lần. Dựng que gạt vụ trựng dàn
đều dịch tế bào lờn khắp bề mặt thạch. Số tế bào cấy trờn bề mặt thạch phải được dàn đều và khụng nờn vượt quỏ vài trăm.
- Cỏc đĩa petri đó được cấy dịch tế bào, gúi kớn và đặt ỳp ngược đĩa trong tủấm 370C. Sau 24 giờđếm số khuẩn lạc trong mỗi đĩa.
c. Cỏch đếm
- Lấy bỳt chỡ kẻ hai đường vuụng gúc dưới đỏy đĩa Petri và đỏnh dấu thứ tự từng vựng I, II, III, IV.
- Đếm số khuẩn lạc trong từng vựng, nhớđỏnh dấu cỏc khuẩn lạc đó đếm. - Số lượng tế bào vi sinh vật trong 1 ml mẫu được tớnh theo cụng thức sau đõy:
Số tế bμo n
Trong đú:
n: số khuẩn lạc trung bỡnh trong một đĩa petri ở một độ pha loóng nhất định. v: thể tớch dịch mẫu đem cấy.
D: hệ số pha loóng
2.4.3.2 Phương phỏp phõn lập vi khuẩn từ bựn hoạt tớnh [2, 21, 28, 33] a. Pha loóng mẫu ( tiến hành tương tự như trờn) a. Pha loóng mẫu ( tiến hành tương tự như trờn)
b. Cấy mẫu
- Thể tớch cỏc mẫu được cấy lờn thạch đĩa thường là 0,1 ml.
- Lấy que gạt vụ khuẩn phõn bốđều mẫu trờn bề mặt thạch. Đậy nắp đĩa lại để thấm hỳt hết mẫu trong vài phỳt.
- Úp ngược đĩa thạch rồi đem ủ trong tủấm ở 370C.