2 1 Thành phần hóa học của lá [9,14,16,18,19,0]
4.2.2.đưa chất phân tắch vào cột
Yêu cầu của việc ựưa chất phân tắch vào cột là phải phân tán chất thử thành một lớp mỏng ựồng ựều trên mặt cột bằng phẳng. Có nhiều phương pháp ựưa chất phân tắch vào cột.
Phương pháp dùng ựĩa giấy:
Dùng giấy lọc cắt thành một ựĩa tròn có ựường kắnh nhỏ hơn ựường kắnh trong của cột khoảng 0.5 mm. Dùng kim châm thành những lỗ thủng cách ựều nhau. Chất cần phân tắch ựược hòa tan trong một lượng dung môi vừa ựủ, cho
Trọng lượng chất phân tắch Trọng lượng chất hấp phụ
sấy, rồi tiếp tục tẩm dung dịch thuốc thử. Nếu tiến hành với cột lớn, lượng chất thử nhiều, có thể dùng nhiều ựĩa giấy.
Sau khi cột ựã ựược ổn ựịnh với dung môi, mở vòi cho dung môi chảy cho ựến khi mức dung môi bằng với mặt ngang chất hấp phụ thì khóa vòi lại. đặt cấn thận các ựĩa giấy lên mặt cột, dùng ống hút cho dung môi tẩm ướt ựều giấy, cho một lớp cát mịn lên giấy và bắt ựầu cho dung môi chảy.
Cho thẳng dung dịch thử lên cột:
Hòa tan chất phân tắch vào một lượng vừa ựủ dung môi (càng ắt càng tốt nhưng phải bảo ựảm hòa tan hoàn toàn). Dung dịch thử có nồng ựộ càng ựậm ựặc mới nằm thành một lớp mỏng trên ựầu cột. Cột ựã ổn ựịnh, mở vòi cho dung môi chạy cho ựến khi mặt cột hấp phụ vừa khô thì ựóng lại. Dùng ống hút cho dung dịch thử chảy dọc thành cột. Mở khóa bên dưới cho dung dịch thử ngấm vào cột (không ựược ựể chất hấp phụ ở ựầu cột bị khô). Khi toàn bộ lớp dung dịch thử ựã ngấm hết vào cột, dùng ống hút lấy một ắt dung môi rửa thành cột và cũng cho ngấm hết vào cột. Tiếp tục cho dung môi ựể bắt ựầu quá trình giải ly.
Trộn chất thử với một lượng chất hấp phụ:
Trộn dung dịch chất phân tắch với một lượng nhỏ chất hấp phụ cho thật ựều, sấy khô rồi cho vào cột bằng cách rải thành một lớp ựều ựặn trên mặt cột.
Trong ba cách trên, cách cho thẳng dung dịch vào cột là gọn và nhanh hơn cả, nhưng phải bảo ựảm các yêu cầu kỹ thuật sau:
- Chất thử hòa tan hoàn toàn.
- Dung dịch chất thử phải nạp vào cột ựều.
- Khi toàn bộ chất thử ngấm hết vào cột, mới cho tiếp dung môi mới. - Cho dung môi nhẹ nhàng, không làm xáo ựộng mặt cột. Nếu chất thử ngấm vào cột tạo thành những lớp có bề dày ựều nhau là chứng tỏ kỹ thuật ựảm bảo.