- 32 Nước cất đủ 100ml
2.2.4.Phƣơng pháp đếm số lƣợng bào tử trên 1 gam chế phẩm 2.2.5.1.Nguyên tắc
2.2.5.1. Nguyên tắc
Tế bào sống là tế bào có khả năng phân chia tạo thành khuẩn lạc trên môi trường chọn lọc. phương pháp này có đăc điểm là cho phép định lượng chọn lọc vi sinh vật tùy môi trường và điều kiện nuôi cấy. Phương pháp này có thể thực hiện bằng kỹ thuật trải đĩa hay đổ đĩa. Trong phương pháp này cần thực hiện pha loãng mẫu thành nhiều độ pha loãng bậc 10 liên tiếp sao cho có độ pha loãng với mật độ tế bào thích hợp để các khuẩn lạc riêng lẻ trên bề mặt thạch với số lượng đủ lớn để hạn chế sai số khi đếm và tính toán. Mật độ tế bào quá lớn làm cho khuẩn lạc chồng chéo lên nhau hoặc tạo thành màng sinh khối. Ngược lại, số lượng khuẩn lạc trên một đĩa quá nhỏ sẽ không có giá trị thống kê. Số lượng khuẩn lạc tối đa khoảng 25 – 250 khuẩn lạc/đĩa.
2.2.5.2. Cách tiến hành
Cân 10g chế phẩm Trichoderma vào erlen chứa 90ml nước muôi sinh lý vô trùng lắc đều, ta được huyền phù có độ pha loãng là 10-1.
Cho vào máy lắc, trong 30phút, hút 1ml mẫu có độ pha loãng 10-1, cho vào ống nghiệm chứa sẵn 9ml nước muối sinh lý vô trùng lắc đều ta được độ pha loãng 10-2, tiếp tục pha loãng mẫu bậc 10 để có các độ pha loãng là 10-3, 10-4,..
Trải và ủ: cho 0,1ml dung dịch có độ pha loãng thích hợp vào đĩa petri chứa sẵn môi trường. Dùng que trang đã khử trùng, trải đều dung dịch mẫu lên mặt thạch, lật ngược đĩa petri, gói lại. Đặt vào tủ ấm ở 300
C trong 48h. Thực hiện tương tự các mẫu còn lại.
- 37 -
Hình 2.2 : Phương pháp pha loãng mẫu theo dãy thập phân.