N TS = (%) v m (100 W)
2.2.6. Phương pháp phân tích và đánh giá chất lượng tinh dầu [1,19]
2.2.6.1. Phương pháp xác định các chỉ số hoá lý của tinh dầu
a. Xác định chỉ số khúc xạ
Xác định bằng khúc xạ kế kiểu Anbe ở nhiệt độ 200C. Đầu tiên điều chỉnh máy nhằm triệt tiêu hiện tượng tán sắc ánh sáng để có thể nhìn thấy rõ ranh giới của miền sáng, tối. Sau đó chuẩn lại để thấy rõ nét vạch chuẩn chữ thập giữa thị trường.
Mở hộp lăng kính, lấy bông thấm ete hay axeton lau khô mặt lăng kính. Nhỏ giọt tinh dầu lên mặt lăng kính mờ bên dưới rồi áp lăng kính lại.
Nhìn vào thị kính, sửa hiện tượng tán sắc (nếu có), rồi chuẩn lại lăng kính sao cho ranh giới giữa hai miền sáng tối cắt đúng giao điểm chữ thập. Nhìn sang vạch chia độ và đọc chỉ số chiết quang ở ngay vạch chuẩn.
b. Xác định tỷ khối của tinh dầu
Xác định bằng bình tỷ khối. Bình tỷ khối được rửa sạch sẽ, sấy khô.
Tỷ khối của tinh dầu là tỷ số giữa khối lượng của tinh dầu với khối lượng của nước ở cùng một thể tích ở nhiệt độ quy định.
Cách tiến hành: Cân bình tỷ khối trên cân phân tích, rót nước cất vào đầy bình sao cho không được có bọt khí xuất hiện, cân bình với nước cất và ghi lại kết quả, đổ nước đi, đem bình đi sấy khô, đổ tinh dầu vào đầy bình và chú ý không cho bọt khí xuất hiện, đem cân bình và tinh dầu, ghi lại kết quả.
Kết quả được tính như sau: g1 - g d =
g2 - g Trong đó:
d: Tỷ khối
g1: Khối lượng bình và tinh dầu, g g2: Khối lượng bình và nước cất, g g: Khối lượng bình, g
c. Xác định chỉ số axít
Chỉ số axít là số mg KOH dùng để trung hoà axít tự do có chứa trong 1g tinh dầu.
Nguyên tắc xác định dựa vào sự trung hoà axít tự do trong tinh dầu bằng kiềm theo phản ứng:
RCOOH + KOH RCOOK + H2O
Cân khoảng 2g tinh dầu đã làm khan nước với độ chính xác đến 0,005g cho vào bình cầu có nút mài. Cho khoảng 10ml etanol trung tính để hoà tan tinh dầu. Nhỏ 3-4 giọt phenolphtalein trung tính để làm chất chỉ thị mầu. Chuẩn độ bằng dung dịch KOH 0,1N pha trong rược etylic đến khi xuất hiện mầu hồng nhạt bền trong 10 giây.
Chỉ số axít tính theo công thức: 5,16 . V . k CSA =
m
Trong đó:
CSA: Chỉ số axit của mẫu tinh dầu
V: Thể tích KOH 0,1N đã dùng để chuẩn độ, ml 5,16: Số mg KOH có trong 1ml dung dịch KOH 0,1N m: Lượng tinh dầu đem phân tích, g
k: Hệ số điều chỉnh nồng độ (từ nồng độ đã pha được sang nồng độ chuẩn 0,1N)
2.2.6.2. Phương pháp xác định thành phần hóa học của tinh dầu hương bài
Thành phần hóa học có trong tinh dầu hương bài được xác định bằng phương pháp sắc kí khí khối phổ GC-MS. GC-MS được thực hiện trên thiết bị GC-MS 2010 Shimadzu với các điều kiện: năng lượng ion hóa 70 eV; cột tách DB-Wax-MS (30 m x 0,25 mm x 0,25µm); chương trình nhiệt độ ở 700C trong thời gian 10 phút, sau đó gia nhiệt với tốc độ 50C / phút đến 2300C giữ trong 15 phút; nhiệt độ bơm mẫu 2300C; nhiệt độ detector 2500C; nhiệt độ buồng bơm mẫu 2000C. Sau đó định tính và nhận biết các thành phần bằng cách so sánh các mẫu phân rã MS của nó với các mẫu phân rã các chất có trong thư viện của máy, còn định lượng các thành phần theo tỷ lệ phần trăm diện tích peak của nó trên tổng diện tích các peak có trong hỗn hợp.
Việc xác định thành phần hóa học của tinh dầu hương bài được tiến hành tại Phòng Thử nghiệm sắc ký – VILAS 335 thuộc Trung tâm Giáo dục và Phát triển sắc ký – Trường Đại học Bách khoa Hà Nội.