6. Bố cục của khóa luận
3.5.2.Thử hoạt tính độc tế bào
Kết quả thử hoạt tính kháng sinh được trình bày ở bảng 3.8.
Bảng 3.8. Kết quả thử hoạt tính độc tế bào
Dịch chiết được kiểm tra hoạt tính ức chế sự phát triển của tế bào ung thư thông qua phép thử gây độc tế bào với dòng tế bào ung thư biểu mô KB. Trong khi chất đối chứng ellipticin cho giá trị IC50 là 0,51μg/ml thì dịch chiết hạt tiêu đen theo kết quả trên cho thấy không có khả năng ức chế dòng tế bào này.
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ I. Kết luận
Qua quá trình nghiên cứu, chúng tôi đã thu được các kết quả sau đây:
- Đã xác định được một số chỉ tiêu hóa lý: Độ ẩm: 14.702%; hàm lượng tro: 4.184%; hàm lượng kim loại nặng phù hợp với tiêu chuẩn của Bộ Y tế đối với gia vị.
- Đã khảo sát và tìm được các điều kiện chiết tối ưu: thời gian chiết là 8h, tỷ lệ rắn – lỏng là 1/10.
- Bằng phương pháp GC-MS đã định danh được thành phần hóa học một số hợp chất trong cắn chiết hạt tiêu đen: Piperine (80,41%); Caryophyllene (13,11%); 2,3-Dihydro-7-methoxyfuro(2,3-b)quinoline (2,49%); Naphthalene, decahydro-4a- methyl-1methylene-7-(1-methylethenyl)-, [ 4aR-(4aα, 7α, 8aβ)] (2,02%); Chavixin (1,97%).
- Dịch chiết hạt tiêu đen có hoạt tính kháng chủng vi sinh vật gram (+)
Bacillus subtilis với giá trị IC50 là 82,53μg/ml, không có hoạt tính với các chủng Gram (-) cũng như không có khả năng ức chế với dòng tế bào ung thư biểu mô KB.
II. Kiến nghị
Thông qua kết quả của đề tài, tôi mong muốn đề tài được phát triển rộng hơn về một số vần đề như:
- Tách và phân lập các cấu tử tinh khiết từ dịch chiết hạt tiêu đen. Trên cơ sở đó xác định cấu trúc và thử hoạt tính sinh học để đi đến những nghiên cứu ứng dụng vào dược học.
- So sánh khả năng chiết tách hạt tiêu đen trong các loại dung môi khác nhau, trên các vùng nguyên liệu khác nhau để có cơ sở khoa học đánh giá sự ảnh hưởng của khí hậu, thổ nhưỡng đến thành phần và tính chất của dịch chiết.
TÀI LIỆU THAM KHẢO * Tiếng Việt
[1]. Đái Duy Ban (2008), Các hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học phòng chống một số bệnh cho người và vật nuôi, Nhà xuất bản Khoa học tự nhiên & công
nghệ, Hà Nội.
[2]. Nguyễn Văn Đàn và Ngô Ngọc Khuyến (1999), Hợp chất thiên nhiên dùng làm
thuốc, Nhà xuất bản Y học, Hà Nội.
[3]. Phạm Thanh Kỳ (2007), Dược liệu học, Nhà xuất bản Y học, Hà Nội.
[4]. Từ Minh Koóng (2007), Kĩ thuật sản xuất dược phẩm, Tập 1, Nhà xuất bản Y học, Hà Nội.
[5]. Đỗ Tất Lợi (2004), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất bản Y học, Hà Nội.
[6]. Lê Thị Mùi (2008), Bài giảng phân tích công cụ, Trường Đại học Sư phạm – Đại học Đà Nẵng.
[7]. Tôn Nữ Tuấn Nam (2008), Báo cáo đánh giá chất lượng và thị trường Hồ tiêu
tại Việt Nam, Dự án quản lý bền vững nguồn tài nguyên thiên nhiên miền Trung.
[8]. Hồ Viết Quý (2006), Chiết tách phân chia các chất bằng dung môi hữu cơ (Lý
thuyết – Thực hành - Ứng dụng), Tập 2, Nhà xuất bản Khoa học và Kỹ thuật.
[9]. TS. Nguyễn Đăng Đức (2008), Giáo trình học phân tích, Trường Đại học Thái Nguyên.
[10]. Viện Dược liệu (2008), Kỹ thuật chiết xuất dược liệu, Nhà xuất bản Khoa học và Kỹ thuật, Hà Nội.
* Tiếng Anh
[11]. Dr. J. Pion, G. Rodriguez-Feo, P. Borges, A. Rosado, 1990, “Chemistry and sensory properties of black pepper oil (Piper nigrum L.)”, J. Food/Nahrung, 34 (6), pp 555–560.
[12]. Girija Raman and Vilas G. Gaikar, 2002, “Extraction of Piperine from Piper nigrum (Black Pepper) by Hydrotropic Solubilization”, Ind. Eng. Chem. Res., 41
[13]. I.P.S. Kapoor, Bandana Singh, Gurdip Singh, Carola S. De Heluani, M.P. De Lampasona and Cesar A.N. Catalan, 2009, “Chemistry and in Vitro Antioxidant Activity of Volatile Oil and Oleorereisins of Black Pepper (Piper nigrum)”, J. Agric. Food Chem, 57(12), pp 5358-5364.
[14]. Leopold Jirovetz, Gerhard Buchbauer, Martin Benoit Ngassoum, Margit Geissler, 2002, “Aroma compound analysis of Piper nigrum and Piper guineense essential oils from Cameron using solid-phase microextraction-gas chromatography, solid-phase microextraction-gas chromatography-mass spectrometry and olfactometry”, Journal of Chromatography A, 976 (1-2), pp265-275.
[15]. William W. Epstein , David F. Netz and Jimmy L. Seidel, 1993, “Isolation of piperine from black pepper”, J. Chem. Educ., 70 (7), pp 598.
* Trang web
[16]. Tra cứu cây thuốc <http://www.uphcm.edu.vn/caythuoc/index > [17]. Wikipedia <http://vi.wikipedia.org/wiki/Hồ_tiêu>
[18]. Cây thuốc quý <http://caythuocquy.info.vn/tieu-cay-kinh-te-cay-thuoc.html> [19]. Dược liệu <http://www.duoclieu.org/ho-tieu-piper-nigrum-l-ho-ho-tieu.html> [20]. Hiệp hội Hồ tiêu Việt Nam <http://www.peppervietnam.com/>
PHỤ LỤC KẾT QUẢ ĐO AAS
ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM
TRƯỜNG ĐHSP Độc lập – Tự do – Hạnh phúc
KHOA HÓA ------
---
NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP
Họ và tên sinh viên: Nguyễn Thị Triên Ly Lớp: 08CHD
1. Tên đề tài: “Nghiên cứu chiết tách và xác định thành phần hóa học trong hạt tiêu đen (Piper nigrum L.) ở huyện Đăk Đoa, tỉnh Gia Lai”
2.Nguyên liệu, dụng cụ và thiết bị
- Nguyên liệu: Hạt tiêu đen
- Dụng cụ: Bộ chiết soxhlet, tủ sấy, lò nung, cân phân tích, cốc thuỷ tinh, bình tam giác, bếp điện, bếp cách thuỷ, cốc sứ, bình hút ẩm, …
- Thiết bị: thiết bị cô quay chân không, máy đo quang UV-VIS, máy quang phổ hấp thụ nguyên tử AAS, máy sắc kí khí ghép khối phổ GC-MS.
3. Nội dung nghiên cứu
- Xác định một số chỉ tiêu hóa lý: độ ẩm, hàm lượng tro, hàm lượng kim loại nặng
- Khảo sát các điều kiện chiết: thời gian, tỉ lệ rắn- lỏng
- Xác định thành phần hóa học có trong hạt tiêu đen
- Thử hoạt tính sinh học của dịch chiết hạt tiêu đen 4. Giáo viên hướng dẫn: ThS. Đỗ Thị Thúy Vân 5. Ngày giao đề tài: 10/2011
6. Ngày hoàn thành: 5/2012.
Chủ nhiệm khoa Giáo viên hướng dẫn
PGS.TS Lê Tự Hải ThS. Đỗ Thị Thúy Vân
Sinh viên đã hoàn thành và nộp báo cáo cho khoa ngày … tháng … năm 2012. Kết quả điểm đánh giá:
Ngày … tháng … năm 2012 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG
LỜI CẢM ƠN
Đầu tiên với lòng biết ơn sâu sắc, em xin chân thành cảm ơn cô Đỗ Thị Thúy Vân đã tận tình hướng dẫn, chỉ bảo động viên em trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu và hoàn thành khóa luận này.
Xin chân thành cảm ơn các thầy cô trong khoa, thầy cô công tác tại phòng thí nghiệm khoa Hóa, Ban giám hiệu Trường Đại học Sư phạm Đà Nẵng đã tận tình giảng dạy, giúp đỡ và tạo mọi điều kiện thuận lợi cho em trong suốt quá trình học tập và làm khóa luận.
Em cũng xin chân thành cảm ơn các cán bộ công tác tại Đài Khí tượng Thủy văn khu vực Trung Trung Bộ, Trung tâm Kỹ Thuật Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng 2, Phòng Thử hoạt tính sinh học –Viện Hóa học đã tạo điều kiện giúp đỡ em hoàn thành khóa luận này.
Bước đầu làm quen với nghiên cứu khoa học, mặc dù có nhiều cố gắng xong khó có thể tránh khỏi những hạn chế và thiếu sót. Vì vậy em rất mong nhận được sự đóng góp ý kiến của thầy cô và các bạn.
Đà Nẵng, ngày 14 tháng 5 năm 2010
Sinh viên thực hiện
DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT
STT Chữ viết tắt Tên
1 AAS Quang phổ hấp thụ nguyên tử 2 UV-VIS Quang phổ hấp thụ phẩn tử 3 GC-MS Sắc kí khí ghép khối phổ
DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU
STT Bảng Danh mục bảng Trang
1 1.1 Các chỉ tiêu hóa lý của hạt tiêu đen 11
2 2.1 Sự hấp thụ ánh sáng của dung dịch màu 27
3 3.1 Kết quả khảo sát độ ẩm trong hạt tiêu đen 31
4 3.2 Kết quả khảo sát hàm lượng tro trong hạt tiêu đen 31 5 3.3 Kết quả khảo sát hàm lượng kim loại nặng trong hạt tiêu đen 32 6 3.4 Kết quả mật độ quang của các dịch chiết theo thời gian 33 7 3.5 Kết quả mật độ quang của các dịch chiết theo tỉ lệ rắn-lỏng 34 8 3.6 Thành phần hóa học của cắn chiết hạt tiêu đen 39
9 3.7 Kết quả thử hoạt tính kháng sinh 40
DANH MỤC CÁC HÌNH, ĐỒ THỊ
STT Hình Danh mục hình Trang
1 1.1 Một số loài trong chi Hồ Tiêu 4
2 1.2 Cây hồ tiêu 5 3 1.3 Thân hồ tiêu 6 4 1.4 Lá hồ tiêu 7 5 1.5 Hoa hồ tiêu 7 6 1.6 Quả hồ tiêu 7 7 1.7 Tiêu trắng 8 8 1.8 Tiêu đen 8
9 1.9 Tiêu đỏ và tiêu xanh 8
10 1.10 Một số sản phẩm chế biến từ hạt tiêu 9
11 1.11 Vi phẫu hạt tiêu đen 10
12 1.12 Vi phẫu từng phần của hạt tiêu đen 10
13 2.1 Thu hái nguyên liệu hồ tiêu 19
14 2.2 Hạt tiêu đen và bột xay nhỏ 19
15 2.3 Sơ đồ máy quang phổ hấp thụ nguyên tử AAS 25
16 2.4 Bộ dụng cụ Soxhlet 26
17 2.5 Khảo sát tỉ lệ R/L 28
18 2.6 Khảo sát thời gian 28
19 3.1 Dịch chiết tại các thời gian khác nhau 32
20 3.2 Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc của mật độ quang vào thời gian 33
21 3.3 Dịch chiết với các tỉ lệ R/L khác nhau 34
22 3.4 Đồ thị biễu diễn sự phụ thuộc của mật độ quang vào tỉ lệ R/L 35
23 3.5 Dịch chiết với thuốc thử Mayer 36
24 3.6 Dịch chiết với thuốc thử Bouchardat 36
25 3.7 Sắc kí đồ biểu thị thành phần hóa học trong cắn hạt tiêu đen 37
26 3.8 Phổ khối của piperine 38
MỤC LỤC TRANG PHỤ BÌA
NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP
LỜI CÁM ƠN
MỤC LỤC
DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU DANH MỤC CÁC HÌNH, ĐỒ THỊ MỞ ĐẦU ... 1
1. Lí do chọn đề tài ... 2
2. Mục tiêu của đề tài ... 3
3. Đối tượng, phạm vi nghiên cứu ... 3
4. Phương pháp nghiên cứu ... 3
5. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài ... 3
6. Bố cục của khóa luận ... 4
CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU ... 5
1.1. Sơ lược về họ Hồ tiêu ... 5
1.2. Giới thiệu về cây hồ tiêu ... 5
1.2.1. Tên gọi ... 5
1.2.2. Phân loại khoa học ... 6
1.2.3. Đặc tính sinh thái ... 6
1.2.4. Đặc tính thực vật ... 7
1.2.5. Thu hái và chế biến ... 9
1.3. Tổng quan về hạt tiêu đen ... 10
1.3.1. Hình dạng ngoài ... 10
1.3.2. Vi phẫu ... 11
1.3.3. Một số tiêu chuẩn kỹ thuật đối với hạt tiêu đen ... 12
1.3.4. Thành phần hóa học của hạt tiêu đen ... 12
1.3.5. Tác dụng dược lý ... 15
1.3.6. Công dụng của hạt tiêu đen ... 15
1.3.7. Một số bài thuốc y học cổ truyền sử dụng hạt tiêu đen ... 17
CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU... 20
2.1. Nguyên liệu, dụng cụ, hoá chất ... 20
2.1.2. Xử lí nguyên liệu ... 20
2.1.3. Thiết bị - dụng cụ và hóa chất ... 21
2.2. Sơ đồ nghiên cứu ... 21
2.3. Phương pháp xác định một số chỉ tiêu hóa lý ... 22
2.3.1. Xác định độ ẩm ... 22
2.3.2. Xác định hàm lượng tro... 23
2.3.3. Xác định hàm lượng kim loại nặng... 25
2.4. Phương pháp chiết và khảo sát các điều kiện chiết tối ưu ... 26
2.4.1. Phương pháp chiết ... 26
2.4.2. Khảo sát các điều kiện chiết tối ưu ... 27
2.5. Định tính alkaloid trong dịch chiết ... 29
2.6. Xác định thành phần hóa học của hạt tiêu đen bằng phương pháp GC-MS ... 30
2.7. Thử hoạt tính sinh học ... 30
2.7.1. Hoạt tính kháng sinh ... 30
2.7.2. Hoạt tính độc tế bào ... 31
CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN ... 32
3.1. Kết quả xác định một số chỉ tiêu hóa lý của hạt tiêu đen ... 32
3.1.1. Độ ẩm ... 32
3.1.2. Hàm lượng tro ... 32
3.1.3. Hàm lượng kim loại nặng ... 33
3.2. Kết quả khảo sát các điều kiện chiết... 33
3.2.1. Thời gian chiết ... 33
3.2.2. Tỷ lệ rắn lỏng ... 35
3.3. Kết quả định tính alkaloid trong dịch chiết hạt têu đen ... 36
3.4. Kết quả xác định thành phần hóa học của dịch chiết hạt tiêu đen bằng phương pháp GC-MS... 37
3.5. Kết quả thử hoạt tính sinh học của dịch chiết hạt tiêu đen ... 41
3.5.1. Thử hoạt tính kháng sinh ... 41
3.5.2. Thử hoạt tính độc tế bào ... 42
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ... 43
TÀI LIỆU THAM KHẢO ... 44