6.4.2.1. Khảo sât hoạt tính tương đối của enzyme polyphenol oxidase
* Trích enzyme polyphenol oxidase
Gọt sạch vỏ khoai tđy, rửa sạch vă băo mịn, sau đó cđn khoảng 10 g rồi cho văo 50 mL dung dịch đệm pH 6,8 (pha 100 mL dung dịch đệm phosphate 0,1 M trong 0,4g NaF, chỉnh đến pH 6,8). Hỗn hợp sau đó được trộn đều bằng mây lắc vă lọc bằng giấy lọc hoặc ly tđm lạnh để thu được dịch trích enzyme. Chú ý giữ mẫu kỹ trong nước đâ lúc thao tâc.
http://www.ebook.edu.vn
* Đo hoạt tính tương đối của enzyme polyphenol oxidase
Cho văo cuvette 2,5 mL dung dịch DOPA 4mM (DOPA: 3,4-dihydro-L phenylalanine trong đệm phosphate pH 6,8) (có thể dùng tyrosine) sau đó cho thím 0,5 mL dịch trích enzyme vă quan sât phản ứng hóa nđu ở 37°C bằng câch đo độ hấp thụ với mây quang phổở 475 nm trong 2 phút.
Chú ý: Có thể dùng câc vật liệu khâc để so sânh về hoạt tính của enzyme hóa nđu trích từ khoai tđy, hoặc thay đổi điều kiện xử lý nhiệt hoặc pH để đânh giâ hoạt tính của enzyme năy.
6.4.2.2. Khảo sât hoạt tính tương đối của enzyme peroxidase
* Trích enzyme peroxidase
Hột sen sau khi đê bốc vỏ vă lấy tđm sen sẽđược măi mịn vă cđn 10 g pha trong 100 mL dung dịch đệm phosphate pH 6. Hổn hợp sau đó được trộn đều bằng mây lắc vă lọc bằng giấy lọc hoặc ly tđm lạnh để thu được dịch trích enzyme.
* Đo hoạt tính tương đối của enzyme peroxidase
Phản ứng hóa nđu được thực hiện bằng câch cho lần lượt văo ống nghiệm 2,8 mL dung dịch đệm phosphate pH 6, sau đó cho thím 50 µL guaiacol 27 mM vă 50 µL H2O2 0,8%, 100 µL dịch trích enzyme được cho văo sau cùng để quan sât phản ứng hóa nđu. Hoạt tính tương đối của enzyme hóa nđu POD được tính bằng tốc độ tạo thănh sản phẩm tetraguaiacol có mău nđu tím thông qua sự gia tăng độ hấp thu sau mỗi phút được đo bằng mây đo quang phổở bước sóng 475 nm.