a. Phản ứng với xanh methylene
Nguyín tắc: Trong môi trường acid, acid nucleic kết hợp với xanh methylene tạo kết tủa mău xanh.
Hoâ chất
- Acid nucleic 0,1% - Acid acetic 0,1N
- Dung dịch xanh methylene 0,1%
Tiến hănh
Cho văo ống nghiệm 1 mL dung dịch acid nucleic 0,1%, thím từng giọt acid acetic 0,1N văo đến khi dung dịch hơi vẫn đục. Cho khoảng 5-6 giọt dung dịch xanh methylene 0,1% tạo thănh kết tủa xanh da trời.
b. Câc phản ứng mău phđn biệt ADN vă ARN
Câc phản ứng năy dựa trín sự khâc biệt giữa hai loại đường deoxyribose vă ribose của ADN vă ARN.
* Phản ứng của ADN với diphenylamine
Nguyín tắc: Deoxyribose có trong thănh phần ADN tâc dụng với diphenylamine trong môi trường acid tạo thănh hợp chất mău xanh hấp thụ ở bước sóng 595nm. Phản ứng năy lă cơ sở của phương phâp định lượng ADN bằng phương phâp so mău.
Hoâ chất:
- ADN, ARN thương mại
- Thuốc thử diphenylamine (1g diphenylamine trong 100 mL acid acetic đậm đặc, thím 0,25mL acid sulfuric đậm đặc).
Tiến hănh:
Hòa tan 1mg acid nucleic trong 5mL dung dịch đệm muối
Cho văo hai ống nghiệm, mỗi ống 1mL dung dịch ADN hoặc ARN, thím văo mỗi ống 2 ml thuốc thử diphenylamine. Lắc đều, đem 2 ống nghiệm đun câch thủy đang sôi trong 10 phút. Quan sât sự hình thănh mău ở hai ống nghiệm. Giải thích.
* Phản ứng của ARN với thuốc thử orcinol
Nguyín tắc: Đđy lă phản ứng của đường ribose có trong thănh phần ARN sẽ tạo thănh furfural khi đun nóng với acid chlohydric đậm đặc. Sau đó orcinol sẽ phản ứng với furfural với sự xúc tâc của clorua sắt III tạo thănh hợp chất mău xanh lục. Phản ứng năy lă cơ sở của phương phâp định tính vă định lượng ARN.
Hoâ chất
- Dung dịch ADN vă ARN chuẩn bị như trín
- Thuốc thử orcinol (0,1 gam FeCl3.H2O pha trong 100 mL HCl đậm đặc, thím 3,5 mL orcinol 6% trong alcohol).
Tiến hănh
Cho văo hai ống nghiệm, lần lượt mỗi ống 1 mL dung dịch ADN hoặc ARN, thím văo mỗi ống 1,5 mL thuốc thử orcinol. Lắc đều, đem 2 ống nghiệm đun câch thủy đang sôi trong 20 phút. Quan sât sự hình thănh mău ở hai ống nghiệm. Giải thích.