§3. ENZYME NUCLEASE
§2. QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH CHỈ THỊ PHÂN TỬ PROTEIN
của cơ thể. Nghiên cứu xác định cơ sở protein của tính trạng hình thái, cấu tạo, sinh lí, hoá sinh của cơ thể sinh vật được quan tâm một số khía cạnh cụ thể như
hàm lượng protein, các tiểu phần protein với kích thước phân tử khác nhau. Quy trình xác định chỉ thị protein cho một tính trạng nào đó có thể được thực hiện theo các bước sau:
Bước 1. Nghiên cứu đặc tính hình thái, sinh lí
Sàng lọc, phân lập các cá thể theo kết quả đánh giá dựa trên kiểu hình. Những cá thể mang tính trạng quan tâm có thểđược tạo ra do lai giống hoặc đột biến thực nghiệm, sàng lọc trong quần thể tự nhiên và cũng có thể do xử lí, đánh giá trong điều kiện nhân tạo. Hiện nay người ta quan tâm chủ yếu các tính trạng chung chịu ở thực vật (khả năng chịu nhiệt: nóng, lạnh; mặn; hạn; phèn; khả
năng chịu sâu, kháng bệnh), các bệnh do viêm hoặc ung thư ởđộng vật.
Bước 2. Xác định chỉ thị protein
• Chỉ thị hàm lượng protein
- Chiết protein ở giai đoạn sinh trưởng, phát triển quan tâm của cá thể. - Phân tích hàm lượng protein.
• Chỉ thị phân tử protein
- Chiết protein dùng cho điện di, tách chiết phân đoạn protein. - Phân tích thành phần điện di.
- Phân tích đa hình protein.
- Giải trình tự axit amin của protein.
• Western blot
- Chiết protein dùng cho điện di.
- Tách protein bằng điện di trên gel poliacrylamide.
- Chuyển protein từ gel sang màng (PVDF) nhờ điện trường.
• Chỉ thị enzyme
- Chiết enzyme.
- Phân tích định lượng và định tính hoạt độ enzyme. - Phân tích điện di entyme.
Hình 5.3. Sơ đồ phân tích xác định chỉ thị protein
§3. KĨ THUẬT PHÂN TÍCH PROTEIN