2.2.1.1. Nhân dịng ruồi giấm và chia lơ thí nghiệm
Nhân dịng ruồi giấm:
Tiến hành lai với tỷ lệ đực cái (1:1) các cặp ruồi bố mẹ chủng Rugose để tạo dịng ruồi tự kỷ và chủng Canton-S để tạo dịng ruồi đối chứng sinh lý.
Mơi trường thức ăn cơ bản cho ruồi giấm bao gồm các thành phần sau: đường saccarose (5 % w/v), nấm men (5 % w/v), sữa bột (3 % w/v), agar (1 % w/v), acid propionic (0.5 % v/v), natri benzoat 10% (1 % v/v).
Thức ăn cho ruồi được thay 3 ngày một lần, đảm bảo cung cấp nguồn dinh dưỡng đầy đủ cho ruồi đến khi làm thí nghiệm. Ruồi giấm được nuơi trong phịng thí nghiệm ở nhiệt độ 25 ± 1 oC, độ ẩm 50 %, chu kỳ 12 giờ sáng - 12 giờ tối (sáng từ 07 giờ đến 19 giờ). Các thí nghiệm hành vi được thực hiện trong thời gian từ 9 giờ đến 18 giờ).
Chia lơ thí nghiệm:
- Lơ sinh lý: ruồi bố mẹ chủng Canton-S được lai (tỷ lệ 1:1) và nuơi trong mơi trường thức ăn cơ bản.
- Lơ bệnh lý: ruồi bố mẹ chủng Rugose được lai (tỷ lệ 1:1) và nuơi trong mơi trường thức ăn cơ bản.
- Lơ thử:
Ruồi bố mẹ chủng Rugose được lai (tỷ lệ 1:1) và nuơi trong mơi trường thức ăn cơ bản kết hợp BVNC nồng độ 2mg/ml.
20
Ruồi bố mẹ chủng Rugose được lai (tỷ lệ 1:1) và nuơi trong mơi trường thức ăn cơ bản kết hợp BVNC nồng độ 4mg/ml.
2.2.1.2. Quy trình chuẩn bị thu ấu trùng và ruồi trưởng thành phục vụ nghiên cứu
+ Đối với ấu trùng:
Ruồi bố mẹ được chuyển sang ống thức ăn chứa mẫu nghiên cứu. Để ruồi đẻ trứng (2-3 ngày) trong ống thức ăn chứa mẫu, sau đĩ chuyển tồn bộ ruồi bố mẹ ra khỏi ống thức ăn. Để trứng phát triển thành ấu trùng và tiến hành thu ấu trùng giai đoạn ba (third – instar) phục vụ cho thí nghiệm.
+ Đối với ruồi trưởng thành:
Ruồi bố mẹ được chuyển sang ống thức ăn chứa mẫu nghiên cứu. Để ruồi đẻ trứng (2-3 ngày) trong ống thức ăn chứa mẫu, sau đĩ chuyển tồn bộ ruồi bố mẹ ra khỏi ống thức ăn. Ấu trùng nở và đĩng kén trong 6-8 ngày, theo dõi ngày nở của kén, thu cá thể ruồi F1 mới nở, chuyển sang ống thức ăn cĩ mẫu nghiên cứu mới. Các cá thể ruồi F1 này phục vụ cho thí nghiệm ở các thời điểm thích hợp.