Trong nghiên cứu này, vỏ thân đƣợc tách riêng khỏi các phần dƣợc liệu khác, đƣợc cắt nhỏ, sấy ở nhiệt độ 65 độ C để đạt độ ẩm <10%, sau đó đƣợc xay thô bằng thuyền tán, đƣợc chiết bằng phƣơng pháp chiết siêu âm với dung môi ethanol 96%; cất thu hồi dung môi đƣợc cắn gọi là cao toàn phần. Quy trình cụ thể đƣợc trình bày trong mục 2.3.1.1.
Trong phƣơng pháp chiết phân đoạn, muốn có các loại cao có độ phân cực khác nhau, sử dụng các dung môi chiết có độ phân cực khác nhau theo nguyên tắc chung là “ Các chất giống nhau sẽ hòa tan trong nhau” cũng tức các chất kém phân cực sẽ tan tốt trong dung môi kém phân cực và ngƣợc lại các chất phân cực hơn sẽ tan trong dung môi phân cực hơn. Theo đó, sử dụng lần lƣợt các dung môi có độ phân cực tăng dần để chiết cao phân đoạn. Trong khóa luận, dùng cao toàn phần hòa vào nƣớc cất vừa đủ, rồi lần lƣợt lắc phân đoạn với dung môi có độ phân cực tăng dần (theo thứ tự lần lƣợt là n-hexan; ethyl acetat; n-butanol). Cất thu hồi dung môi các phân đoạn thu đƣợc cắn
n-hexan (cắn Hexan); cắn ethyl acetat (cắn EtOAc); cắn n-butanol (cắn BuOH); dịch nƣớc. Quy trình cụ thể đƣợc trình bày trong mục 2.3.1.2.
18
Cách tiến hành Bƣớc 1: Xử lý nguyên liệu:
Vỏ thân đƣợc tách riêng khỏi các phần dƣợc liệu khác, sẽ đƣợc cắt nhỏ, sau đó dải đều lên khay cho vào tủ sấy ở nhiệt độ 65 độ C. Trong quá trình sấy, đảo nguyên liệu cứ 1h một lần cho tới khi kiểm tra độ ẩm nguyên liệu < 10%. Sử dụng thuyền tán làm nhỏ nguyên liệu vỏ thân đã đƣợc sấy khô.
Phần vỏ thân sau khi đƣợc nghiền nhỏ, chuyển vào các bình thủy tinh dung tích 10L, cho vào lƣợng vỏ thân khoảng 4/5 bình theo thể tích, sau đó bổ sung ethanol 96% sao cho đảm bảo phần vỏ thân trong bình đã ngập trong dung môi chiết và để ở nhiệt độ phòng 24h.
Bƣớc 2: Ngâm ấm và chiết siêu âm:
Ngâm ấm: Sau khi các bình vỏ thân đã ngấm dung môi và mực dung môi thấp hơn mực nguyên liệu trong bình thì bổ sung thêm ethanol đảm bảo dung môi ngập trên vỏ thân. Ngâm bình nguyên liệu trên vào bếp gia nhiệt, đặt nhiệt độ 45o
C và ngâm liên tục trong 24h.
Siêu âm: Các bình sau khi ngâm ấm đủ ít nhất 24h, sẽ đƣợc siêu âm 3 lần liên tục, mỗi lần 30 phút, mỗi lần siêu âm cách nhau 30 phút. Ngay sau lần siêu âm cuối, bình sẽ đƣợc mang lọc nóng thu dịch lọc, phần bã vỏ thân thì cho lại vào bình ngâm và bổ sung ethanol 96% vừa đủ cho ngập vỏ thân.
Bƣớc 3: Lặp lại bƣớc 2 thêm 2 lần.
Dịch chiết thu đƣợc của 3 lần chiết siêu âm đƣợc gộp lại, cô quay thu hồi dung môi, cắn thu đƣợc sau cô quay là cao toàn phần.
2.3.1.1. Chiết xuất cao phân đoạn
Cách tiến hành
Bƣớc 1: Cao toàn phần sau khi cô quay hết dung môi, đƣợc xác định khối lƣợng cao toàn phần. Chia cao thành các phần có khối lƣợng khoảng 200g cao. Sử dụng bình gạn 2 lít, cho khoảng mỗi 200g cao vào bình gạn 2 lít đã chuẩn bị, thêm nƣớc cất cho đƣợc khoảng 1,5 lít gồm cả cao và nƣớc. Lắc mạnh để cao có thể phân bố đều vào nƣớc.
Bƣớc 2: Bổ sung khoảng 500ml dung môi n-hexan. Lắc bình gạn liên tục trong 20 phút sau đó lắng hỗn hợp trong bình gạn tự phân lớp trong khoảng 24h. Sau đó
19
chiết lấy phần dịch n-hexan phía trên đem cô quay thu hồi dung môi đƣợc cắn n- hexan, phần dịch chiết nƣớc phía dƣới tiếp tục cho vào bình gạn.
Bƣớc 3: Lặp lại bƣớc 2 thêm 2 lần nữa. Cắn thu đƣợc trong 3 lần chiết đƣợc gộp vào thành cắn n-hexan.
Bƣớc 4: Lần lƣợt chiết 3 lần dịch chiết nƣớc thu đƣợc ở bƣớc 3 bằng ethyl acetat (500ml x 3 lần) rồi chiết tiếp 3 lần dịch chiết nƣớc (thu đƣợc sau chiết bằng ethyl acetat) bằng n-butanol (500 ml x 3 lần) tƣơng tự theo quy trình chiết bằng dung môi n-hexan ở các bƣớc số 2,3.
Sau cùng thu đƣợc cắn n-hexan, cắn ethyl acetat, cắn butanol của vỏ thân Đinh lăng răng.