Cho vào ống nghiệm 1 ml dịch chiết EtOH và cô tới cắn. Hòa tan cắn trong 1 ml nước và thêm vài tinh thể Natri carbonat. Phản ứng dương tính khi thấy có bọt khí nổi lên.
Kết quả: Không thấy bọt khí nổi lên (phản ứng âm tính).
Nhận xét: Dược liệu không chứa acid hữu cơ.
3.1.8. Định tính acid amin
Lấy 3 ml dịch chiết EtOH cho vào ống nghiệm. Thêm 1-3 mảnh ninhydrin, đun sôi 2 phút, phản ứng dương tính khi thấy dung dịch chuyển màu tím.
Kết quả: Dung dịch giữ nguyên màu sắc (phản ứng âm tính).
Nhận xét: Dược liệu không chứa acid amin.
Định tính các thành phần trong dịch chiết nước
Cho 10 g bột dược liệu vào bình nón dung tích 50 ml, thêm 30 ml nước cất, đun sôi trực tiếp 5 phút. Lọc lấy dịch lọc làm các phản ứng sau:
3.1.9. Định tính tanin
- Ống 1: 2 ml dịch lọc, thêm 2 giọt FeCl3 5% (TT). Phản ứng dương tính khi xuất hiện màu xanh đen hoặc xanh nâu nhạt.
Kết quả: Dung dịch xuất hiện màu nâu nhạt (phản ứng dương tính).
- Ống 2: 2 ml dịch lọc, thêm 2 giọt chì acetat 10% (TT). Phản ứng dương tính khi xuất hiện tủa bông.
Kết quả: Xuất hiện tủa bông (phản ứng dương tính).
- Ống 3: 2 ml dịch lọc, thêm 5 giọt dung dịch gelatin 1% (TT). Phản ứng dương tính khi xuất hiện tủa bông trắng.
Kết quả: Không xuất hiện tủa bông trắng (phản ứng âm tính).
3.1.10. Định tính đường khử tự do
Lấy 2 ml dịch chiết nước cho vào ống nghiệm. Thêm vào đó 0,5 ml thuốc thử Fehling A và 0,5 ml thuốc thử Fehling B. Đun sôi cách thủy vài phút. Phản ứng dương tính khi thấy xuất hiện tủa đỏ gạch.
Kết quả: Có xuất hiện tủa đỏ gạch (phản ứng dương tính).
Nhận xét: Dược liệu có chứa đường khử tự do.
3.1.11. Định tính polysaccharid
Cho vào 2 ống nghiệm: Ống 1: 4 ml nước cất + 5 giọt thuốc thử Lugol; ống 2: 4 ml dịch chiết nước + 5 giọt thuốc thử Lugol. Quan sát màu ống 2 đậm hơn ống 1 thì phản ứng dương tính.
Kết quả: Màu của ống 2 đậm hơn ống 1 (phản ứng dương tính).
Nhận xét: Dược liệu có chứa polysaccharid.
Định tính các nhóm chất khác 3.1.12. Định tính alcaloid
- Chiết xuất:
Cho khoảng 10 g bột dược liệu vào bình nón dung tích 100ml, thấm ẩm bằng dung dịch amoniac đặc (TT), đậy kín bình trong 30 phút. Cho thêm 15 ml cloroform (TT), lắc đều, ngâm 12 giờ. Lọc lấy dịch chiết vào bình gạn. Sau đó lắc kỹ 2 lần, mỗi lần với 10 ml dung dịch acid sulfuric1N (TT). Để phân lớp, gạn lấy dịch chiết acid, cho vào 3 ống nghiệm, mỗi ống 1 ml dịch chiết acid.
- Tiến hành:
+ Ống 1: 1 ml dịch chiết + 2 giọt thuốc thử Mayer (TT). Phản ứng dương tính khi xuất hiện tủa trắng hoặc vàng nhạt.
+ Ống 2: 1 ml dịch chiết + 2 giọt thuốc thử Bouchardat (TT). Phản ứng dương tính khi xuất hiện kết tủa vàng cam đến đỏ.
Kết quả: Không thấy xuất hiện tủa, dung dịch trong suốt (phản ứng âm tính). + Ống 3: 1 ml dịch chiết + 2 giọt thuốc thử Dragendorff (TT). Phản ứng dương tính khi xuất hiện kết tủa màu nâu. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Kết quả: Không thấy xuất hiện tủa, dung dịch trong suốt (phản ứng âm tính).
Nhận xét: Dược liệu không chứa alcaloid hoặc chứa với hàm lượng rất thấp.
3.1.13. Định tính anthranoid
Cho vào ống nghiệm 5 g bột dược liệu, thêm dung dịch acid sulfuric 25% (TT)
tới ngập dược liệu rồi đun sôi trong vài phút. Lọc dịch chiết vào bình gạn, để nguội rồi lắc với 5 ml ether (TT). Lấy 1 ml dịch ether cho vào ống nghiệm, thêm 1 ml dung dịch kali hydroxy 10% (TT), quan sát màu của lớp KOH. Phản ứng dương tính nếu lớp dung dịch KOH màu đỏ.
Kết quả: Lớp dung dịch KOH trong suốt không màu (phản ứng âm tính).
Nhận xét: Dược liệu không chứa anthranoid.
3.1.14. Định tính glycosid tim
Lấy 10 g bột dược liệu vào bình nón dung tích 250 ml, thêm 100 ml EtOH 25% rồi ngâm trong 24 giờ. Lọc dịch chiết vào cốc có mỏ, thêm khoảng 3 ml chì acetat 30% (TT), khuấy đều. Lọc loại tủa, thử dịch lọc nếu vẫn còn tủa với chì acetat, cho thêm 1 ml chì acetat nữa vào dịch chiết, khuấy và lọc lại. Tiếp tục thử cho đến khi dịch chiết không còn tủa với chì acetat. Cho toàn bộ dịch lọc vào bình gạn và lắc kỹ với cloroform (TT) (3 lần, mỗi lần 5 ml), gạn lấy lớp cloroform vào cốc có mỏ khô sạch. Cho dịch chiết các ống nghiệm nhỏ, bốc hơi dung môi trên nồi cách thủy cho đến khô. Cắn còn lại để làm các phản ứng định tính sau.
Hòa tan cắn trong ống nghiệm 1 bằng 1 ml anhydrid acetic (TT), lắc đều. Nghiêng ống 45° cho từ từ theo thành ống 1 ml acid sulfuricđặc (TT), tránh xáo trộn chất lỏng trong ống. Quan sát nếu thấy mặt tiếp xúc giữa 2 lớp chất lỏng xuất hiện vòng màu tím đỏ, lớp chất lỏng phía dưới có màu hồng, lớp trên màu xanh lá thì phản ứng dương tính.
Kết quả: Không xuất hiện hiện tượng như trên (phản ứng âm tính). - Phản ứng Baljet:
Hòa tan cắn trong ống nghiệm 2 bằng khoảng 1 ml EtOH 90%, lắc đều, nhỏ từng giọt thuốc thử Baljet mới pha (1 phần dung dịch acid picric 1% (TT) và 9 phần dung dịch natri hydroxy 10% (TT)) nếu thấy xuất hiện màu đỏ cam thì phản ứng dương tính.
Kết quả: Không thấy xuất hiện màu đỏ cam (phản ứng âm tính). - Phản ứng Legal:
Hòa tan cắn trong 0,5 ml EtOH 90%, lắc kỹ, nhỏ 1 giọt thuốc thử natri nitroprussiat 1% (TT) và 2 giọt dung dịch natri hydroxy 10% (TT). Lắc đều, nếu thấy xuất hiện màu đỏ cam thì phản ứng dương tính.
Kết quả: Không xuất hiện màu đỏ cam (phản ứng âm tính).
Nhận xét: Dược liệu không chứa glycosid tim
Kết quả định tính các nhóm chất bằng phản ứng hóa học trong quả thể của loài
G. capense được trình bày trong bảng 3.1.
Bảng 3.1. Kết quả định tính các nhóm chất bằng phản ứng hóa học trong quả thể của loài G. capense
STT Nhóm chất Phản ứng Kết quả Nhận xét
1 Chất béo Tạo vết mờ trên giấy lọc ++ Có
3 Phytosterol Phản ứng Liebermann – Burchard ++ Có
4 Saponin Phản ứng tạo bọt + Có
Phản ứng Salkowski +
5 Coumarin Phản ứng đóng mở vòng lacton - Không có
Phản ứng Diazo hóa -
6 Flavonoid
Phản ứng cyanidin -
Không có Phản ứng với dung dịch FeCl3 5% +
Phản ứng với kiềm - (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
7 Acid hữu cơ Phản ứng với tinh thể Na2CO3 - Không có
8 Acid amin Phản ứng với ninhydrin - Không có
9 Tanin Phản ứng với dd FeCl3 5% + Không có Phản ứng với chì acetat 10% + Phản ứng với gelatin 1% - 10 Đường khử tự do
Phản ứng với TT Fehling A/B
+ Có
11 Polysaccharid Phản ứng với thuốc thử Lugol + Có
12 Alcaloid
Phản ứng với TT Mayer ++
Không có Phản ứng với TT Bouchardat -
Phản ứng với TT Dragendorff -
13 Anthranoid Phản ứng Borntraeger - Không có
14 Glycosid tim Phản ứng Liebermann- Burchard - Không có Phản ứng Baljet - Phản ứng Legal - Chú thích: (-): Phản ứng âm tính (+): Phản ứng dương tính
(++): Phản ứng dương tính rõ
Nhận xét: Qua các phản ứng định tính, sơ bộ thấy trong quả thể của loài G. capense có chứa chất béo, phytosterol, saponin, đường khử tự do và polysaccharid. Không chứa carotenoid, tannin, coumarin, flavonoid, alcaloid, acid hữu cơ, acid amin, anthranoid và glycosid tim.