a. Xỏc định tổng số vi sinh vật hiếu khớ:
Nguyờn tắc: Sử dụng kĩ thuật số đĩa, đếm số khuẩn lạc trờn mụi trường thạch, sau khi ủ hiếu khớ ở nhiệt độ 300C trong thời gian từ 48-72 giờ. Số lượng vi khuẩn hiếu khớ trong 1g mẫu sản phẩm thực phẩm kiểm nghiệm được tớnh theo số khuẩn lạc đếm được từ cỏc đĩa nuụi cấy theo cỏc đậm độ pha loóng. Mụi trường: (Mụi trường thạch thường glucoza).
Pepton: 10g NaCl : 50g Cao thịt: 5g Glucoza: 1g Thạch : 15-20g Nước cất: 1000ml b. Xỏc định tổng số Coliforms và E.coli.
Nguyờn tắc: tiến hành theo phương phỏp MPN (phương phỏp nhiều ống) và sử dụng bảng chỉ số MPN để tớnh kết quả.
Tổng sốcoliform được xỏc định bằng số ống dương tớnh sau khi nuụi cấy vào cỏc ống canh thang lactoza mật bũ ở 350C -370C trong thời gian là 24-48 giờ.
Tổng số E. coli được xỏc định bằng cỏc tớnh chất sinh hoỏ từ những ống dương tớnh núi trờn sau khi làm cỏc thử nghiệm IMViC.
Mụi trường và thuốc thử:
Canh thang lactose loóng 13g/l. Canh thang lactose đặc 16g/l. Canh thang lactose mật bũ loóng. Canh thang latose mật bũ đặc.
28
Thạch Desoxycholate latose (DCL) hoặc thạch Desoxycholate Citrat lactose saccarose (DCLS) hoặc thạch Macconkey.
Nước đệm pepton 9%, pH=7,0-7,2. UreIndol.
Mụi trường song đường Clark-Lub. Citrat simmon. Methyl red. Thuốc thử Kowacs. Dung dịch ỏ-Naphtol 5%. Dung dịch KOH 40%. c.Xỏc định tổng số Staphylococcus aureus.
Nguyờn tắc: Sử dụng kĩ thuật cấy lỏng, đếm số khuẩn lạc nghi ngờ trờn mụi trường thạch sau khi ủ hiếu khớ ở 370C trong 24-48 giờ. Khuẩn lạc nghi ngờ
là S. aureus sẽ cú trung tõm đen và xung quanh cú vũng trong suốt trờn mụi trường Baird-Parker cú lũng đỏ trứng và tellurit de potassium.
Xỏc định S. aureus bằng thử nghiệm đụng huyết tương. Mụi trường và thuốc thử:
Nước đệm Pepton 9%.
Canh thang BHI (Brain heart infusion broth). Mụi trường Baird-Parker.
Huyết tương thỏ.
Dung dịch lũng đỏ trứng. Potasium tellurit.
29
Nguyờn tắc: Dựa trờn kĩ thuật hiện Salmonella trong thực phẩm theo phương phỏp của FAO gồm cỏc bước sau:
Chuẩn bị mẫu và đồng nhất mẫu. Trước khi tăng sinh.
Mụi trường nuụi cấy và thuốc thử: Nước đệm peptụn 2 %
Canh thang Selenit
Thạch SS (Salmonella Shigella agar) Thạch xanh brilliant
Mụi trường KIA
Mụi trường Mannit di động Mụi trường ure indol
Mụi trường Lysin decacboxylaza Mụi trường Ornithin decacboxylaza Mụi trường Acginin dehyđrolaza Mụi trường ONPG
Thuốc thử Kovac
e. Xỏc định Clostridium Perfingens.
Nguyờn tắc: Vi khuẩn C. perfringens trong mụi trường thạch chọn lọc trong điều kiện kị khớ sẽ phỏt triển thành cỏc khuẩn lạc cú màu đen. Chọn khuẩn lạc điển hỡnh, xỏc định tớnh chất sinh vật hoỏ học theo thường quy.
Mụi trường, thuốc thử:
Thạch Tryptose Sulfide Cycloserin (TSC agar). Mụi trường lactụza gelatin.
Canh thang gan cục hoặc canh thang thịt. Canh thang nuụi cấy nha bào.
Dung dịch thioglycolat.
30
Nước muối đệm pepton 0.9%. Thuốc nhuộn Gram.
f. Tiờu chuẩn để xỏc định C. perfringens:
Trực khuẩn ngắn: Gr (+); Cú nha bào; Khuẩn lạc màu đen trờn TSC; Nitrit: (+); iron-milk: (+); Lactoza (+); Gelatin (+); Hơi (+).
g. Xỏc định tổng số bào tử nấm men, nấm mốc.
Nguyờn tắc: Sử dụng kỹ thuật đổ đĩa đếm khúm nấm trờn mụi trường thạch, sau khi ủ hiếu khớ ở nhiệt độ 28 $ 10C trong thời gian từ 5 đến 7 ngày. Số lương bào tử nấm men, nấm mốc trong 1g mẫu sản phẩm kiểm nghiệm được tớnh theo số khúm nấm đếm được từ cỏc đĩa nuụi cấy theo cỏc đậm độ pha loóng. Mụi trường:
Nước pepton: Pepton 1g
NaCl 8,5g
Nước cất 1000ml.
Nước pepton cú thạch: Nước đệm pepton 1000ml
Thạch 1g
Vi sinh vật chỉ thị:
− Xỏc định Coliforms, E. coli: Theo phương phỏp nhiều ống (MPN).
− Xỏc định tổng số bào tử nấm men, nấm mốc: Tiến hành lấy mẫu theo TCVN 4886 – 89. Nguyờn tắc sử dụng kỹ thuật đổ đĩa đếm khúm nấm trờn mụi trường thạch sau khi ủ hiếu khớ ở 28 ± 10C trong 5 – 7 ngày.
− S. aureus: Sử dụng kỹ thuật cấy lỏng, đếm khuẩn lạc nghi ngờ trờn mụt trường thạch sau khi ủ hiếu khớ ở điều kiện 370C/24 – 49h.
− Salmonella: Tiến hành theo TCVN 4829-1989 (37oC/48h).
31
PHẦN 3. KẾT QUẢ