Mục đích: Phương pháp thử nghiệm hoạt tính sinh học của flavonoid nhằm đánh giá được khả năng kháng khuẩn của flavonoid chiết suất từ hoa cúc la mã.
Nguyên tắc: Hoạt tính sinh học của phân đoạn flavonoid được thử nghiệm bằng phương pháp khuyêch tán kiểm soát trên đĩa thạch: trải vi sinh vật với một số lượng nhất định trên mặt đĩa thạch, sao cho tiếp xúc đều. Đặt đĩa giấy đã tẩm sẵn terpenoid – steroid lên bề mặt đĩa thạch. Flavonoid sẽ khuyêch tán vào trong đĩa thạch và ức chế sự tăng trưởng của vi sinh vật tạo vòng kháng vi sinh vật xung quanh đĩa giấy.
Thử hoạt tính sinh học sẽ được tiến hành trên các chủng vi khuẩn kiểm định bao gốm: Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Samonella typhi.
Thực nghiệm :
- Hấp khử trùng đĩa petri trong 50 phút. Sau đó để trong tủ sấy 3 giờ để đĩa khô hoàn toàn. Chuẩn bị môi trường nuôi cấy, nấu sôi và khuấy đều. Cho môi trường vào bình thuỷ tinh và đem hấp khử trùng trong 50 phút;
- Cho khoảng 20 ml môi trường nuôi cấy vào đĩa petri, ủ 37 oC trong 24 giờ để kiểm tra độ vô trùng. Cấy các chủng vi sinh vật cần kiểm định vào mỗi đĩa petri (nồng độ vi sinh vật khoảng 108 tế bào;
- Dùng kẹp cho các khoanh giấy lọc Whatman vào lọ flavonoid nguyên chất (C0) và flavonoid được pha loãng trong dung môi DMSO ở các nồng độ khác nhau như: 0,01 % (C1), 0,02 % (C2), 0,03 % (C4), sau đó đặt lên mặt đĩa thạch đã cấy sẵn vi sinh vật kiểm định, mỗi đĩa petri đặt 2-4 đĩa giấy cách đều nhau, ủ 37 oC; sau 24 giờ nuôi cấy lấy ra quan sát, đo đường kính vòng vô khuẩn;
- Quan sát đường kính của vòng vô khuẩn và đo đường kính vòng vô khuẩn. Có hoạt tính kháng khuẩn: có vòng vô khuẩn (có đường kính vòng vô khuẩn lớn hơn 6 mm). Không có hoạt tính kháng khuẩn: không có vòng vô khuẩn (đường kính vòng vô khuẩn nhỏ hơn hoặc bằng 6 mm).
20
CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN