1. 4.1 Hemagglutinin (HA)
3.3.4. Chọn lọc vector tỏi tổ hợp bằng cắt với enzym giới hạn
Để khẳng định chắc chắn cỏc dũng DNA plasmid cú mang hộp gen M1, chỳng tụi tiến hành cắt kiểm tra cỏc DNA plasmid này bằng enzym giới hạn BamH I và Hind III. Hai enzym này đƣợc gắn tƣơng ứng ở đầu 5’ và 3’ của gen. Theo lý thuyết, cỏc dũng plasmid gắn sản phẩm PCR sau khi đƣợc cắt bằng hai enzym giới hạn BamH I và
Hind III sẽ văng ra một đoạn cú kớch thƣớc tƣơng đƣơng với kớch thƣớc của sản phẩm PCR. Ba dũng plasmidcú kớch thƣớc lớn hơn plasmid gốc đƣợc chọn để phõn tớch tiếp bằng phản ứng cắt với hai enzym giới hạn BamH I và Hind III . Sau đú kiểm tra điện di trờn gel agarose 1% (hỡnh 3.4).
Hỡnh 3.4: Kiểm tra cỏc dũng vector tỏi tổ hợp mang hộp gen M1 bằng điện di trờn gel agarose 1%.
1: Sản phẩm PCR gen M1 (dựng làm đối chứng)
2 – 4 : 3 dũng DNA plasmid tỏi tổ hợp đƣợc xử lý bằng enzym giới hạn
BamH I và Hind III. M : Marker DNA
1 2 3 4 M
780bp
3000bp
Kết quả phõn tớch sản phẩm cắt DNA plasmid tỏi tổ hợp cho thấy ở đƣờng chạy số 3, 4 xuất hiện băng cú kớch thƣớc khoảng 780bp tƣơng đƣơng với kớch thƣớc của gen M1. Đƣờng chạy số 2 chỉ xuất hiện băng DNA plasmid mở vũng, cú khả năng plasmid này khụng mang sản phẩm PCR hoặc do trỡnh tự nhận biết của enzym giới hạn
BamH I và Hind III ở sản phẩm PCR đó bị biến đổi khiến cho enzym khụng thể nhận biết để cắt. Từ kết quả trờn, chỳng tụi cú thể kết luận sơ bộ đó thu đƣợc 2 dũng plasmid tỏi tổ hợp mang hộp gen M1. Tuy nhiờn để khẳng định cần cú cỏc phõn tớch tiếp theo.