1. 4.1 Hemagglutinin (HA)
3.3.3. Tỏch chiết DNAplasmid từ tế bào vi khuẩn E.coli
Để chọn đƣợc dũng plasmid tỏi tổ hợp pCRM1 mang hộp gen M1, chỳng tụi nhặt một số khuẩn lạc trắng và một khuẩn lạc xanh, nuụi cấy trong mụi trƣờng LB cú bổ sung khỏng sinh Amp (100àg/ml), lắc tốc độ 200v/p ở 37°C qua đờm. Tỏch chiết plasmid từ cỏc tế bào nuụi cấy, sau đú tiến hành chạy điện di trờn gel agarose 1% kốm theo đối chứng là plasmid gốc. Kết quả đƣợc thể hiện ở hỡnh 3.3.
Hỡnh 3.3: Chọn lọc cỏc dũng plasmid pCR2.1 tỏi tổ hợp mang hộp gen M1 bằng điện di trờn gel agarose 1%.
Đƣờng chạy từ 1-4: DNA plasmid tỏch từ khuẩn lạc trắng Đƣờng chạy 5: DNA plasmid tỏch từ khuẩn lạc xanh
Theo lớ thuyết điện di thỡ phõn tử DNA nào cú kớch thƣớc càng lớn thỡ di chuyển càng chậm, tức là trờn ảnh quan sỏt đƣợc nú sẽ tạo đƣợc vạch sỏng cao hơn so với cỏc phõn tử DNA cú kớch thƣớc nhỏ hơn. Trong vector tỏi tổ hợp ngoài phần gốc là vector pCR2.1 cũn gắn thờm sản phẩm PCR nờn sẽ di chuyển chậm hơn vector gốc pCR2.1 là plasmid tỏch từ khuẩn lạc xanh.
Quan sỏt kết quả điện di trờn cho thấy cú sự chờnh lệch về kớch thƣớc giữa plasmid tỏch từ khuẩn lạc xanh và plasmid tỏch từ khuẩn lạc trắng. Cỏc plasmid từ 1 đến 4 đƣợc tỏch từ khuẩn lạc trắng đều cú đƣờng chạy cao hơn plasmid số 5 đƣợc tỏch từ khuẩn lạc xanh. Điều đú chứng tỏ cỏc dũng plasmid từ 1-4 cú khả năng mang hộp gen M1.
Để khẳng định cỏc plasmid đƣợc tỏch từ khuẩn lạc trắng cú mang hộp gen hay khụng chỳng tụi tiến hành kiểm tra bằng phản ứng cắt với enzym giới hạn.