Khi xác định ở nồng độ phenol rất nhỏ dƣới 0,05mg/l ta xác định theo phƣơng pháp 5530C.
Giai đoạn 1: Lấy mẫu và bảo quản mẫu Giai đoạn 2: Chƣng cất nhƣ 2.2.1 [36]. Giai đoạn 3: Thƣ̣c hiện phản ƣ́ng màu
Lấy vo ml dung dịch X chuyển vào bình định mức 100ml, thêm 2,5ml dung dịch NH 0,5M; 2,0ml hỗn hợp đệm K 2HPO4 và KH 2PO4; 1,0 ml dung dịch 4- aminoantipyrin 0,1M; 50ml nƣớc cất ; 1,0ml dung dịch K 3Fe(CN)6 0,25M; lắc đều và định mức đến vạch bằng nƣớc cất . Phức antipyrine màu nâu đỏ , ổn định , cƣờng độ màu tỉ lệ với hàm lƣợng phenol có trong mẫu.
Giai đoạn 4: Chiết phƣ́c màu bằng clorofom
Lấy vx =100ml dung dịch x + vy =25ml clorofom cho vào phễu chiết 250ml, lắc đều nhiều lần. Dung dịch chiết chia thành 2 lớp. Chiết lấy ≈ 25ml dung dịch màu phía dƣới (dung dịch y) vào bình định mức.
Giai đoạn 5: Lọc, thấm loại bỏ nƣớc
Mang dung dịch chiết đƣợc đem lọc qua lớp Na2SO4 khan đã đƣợc sấy khô thu vào bình định mức 25ml và định mƣ́c lại bằng clorofom thu đƣợc vz = 25ml dung dịch z.
Giai đoạn 6: Thƣ̣c hiện đo quang và tính toán kết quả
Mang dung dịch z thu đƣợc ở trên thƣ̣c hiện đo quang bằng máy UV-VIS Varian Cary 50 series ở bƣớc sóng lí thuyết 455nm. Xác định nồng độ phenol nhờ đƣờng chuẩn.
Tính nồng độ phenol trong mẫu dung dịch X0 theo công thức: 0 . .1000 (13) . z x x z C V C V V
Nếu màu quá nhạt hoặc quá đậm, ta có thể tăng hoặc giảm thể tích dung dịch sao cho nồng độ phenol trong mẫu đo nằm trong khoảng tuyến tính. Lƣợng tối thiểu phát hiện đƣợc tƣơng đƣơng với 0,01 mg/l phenol trong 25ml clorofom phần chiết và đƣợc đo bằng cuvet 50mm [36].