a. Nguyên tắc
1.270. Khi đun nóng mẫu vật có chứa nitơ trong H2SO4 đậm đặc với sự hiện diện của chất xúc tác thích hợp thì tất cả các họp chất hữu cơ bị oxy hóa, còn NH3 được giải phóng ra liên kết với H2S04 tạo thành (NH4)2S04
1.271. Dùng kiềm mạnh (NaOH) trong điều kiện đun nóng đấy NH3 từ muối (NH4)2SƠ4
Hĩnh2 thành ra thể tự do. NH3 tạo thành được lối cuốn bằng hơi nước và được cất qua bình hứng có chứa dung dịch acid boric và hỗn họp thuốc thử.
1.272. (NH4)2S04 + 2NaOH = 2NH4OH +Na2S04
1.273. NH4OH -> NH3 + H2O
1.274. NH3 + 4H3B03 (NH4)2B407
1.275. Sau đó định lượng amoni tetraborat tạo thành bằng dung dịch H2SƠ4 0,1N theo phản ứng sau:
1.276. (NH4)2B407 + H2S04 + 5H2Ơ (NH4)2S04 + 4H3B03
b. Tiến hành 1. Vô cơ hóa mẫu
- Cân chính xác 0,05-lg mẫu đã nghiền nhuyễn cho vào bình Kjeldalhl có thế tích 200ml, sau đó thêm 5ml H2SO4 đậm đặc. Đe rút ngắn thời gian vô cơ hóa, ta thêm vào bình một lượng chất xúc tác cần thiết là 0,5 g (K2SO4: CuSƠ4: Se (100:10:1))
- Đặt bình vào hệ thống vô cơ hóa mẫu và cài đặt thông số về thói gian, nhiệt độ.
Đun sôi và luôn giữ cho bình sôi nhẹ khoảng 2-3 giờ cho đến khi dung dịch trong bình
nước cất rồi lắc nhẹ tráng thành bình, thấy không còn những hạt muội đen li ti là được. 2. Lôi cuốn đạm
- Đặt bình Kjeĩdahl có chứa mẫu đã vô cơ hóa vào hệ thống chưng cất mẫu - Cho lOml nước cất vào bình, thêm vào 30ml dung dịch NaOH 30%
- Hút chính xác 20ml dung dịch acid boric 2% có chứa hỗn hợp thuốc thử vào bình tam giác 250ml (bình hứng)
- Đặt bình hứng vào hệ thống chưng cất mẫu sau cho đấu ống sinh hàn ngập trong dung dịch acid boric.
- Tiến hành chưng cất khoảng 5 phút, sau đó dùng giấy quỳ tím đế kiểm tra sụ kết thúc quá trình lôi cuốn đạm. Neu giấy quỳ không bị chuyển sang màu xanh là quá trình lôi cuốn đạm kết thúc. Dùng nước cất để rửa đầu ống sinh hàn, sau đó lấy bình ra để tiến hành chuẩn độ.
3. Chuẩn độ
1.277. Dùng dung dịch H2SƠ4 0,1N để chuẩn độ dung dịch trong bình hứng cho đến khi dung dịch chuyến từ màu xanh sang hồng nhạt. Đọc thế tích dung dịch H2SƠ4 0,1N đã dùng.
c. Tính toán kết quả
1.278. Hàm lượng nitơ tổng số = (0,0014.VH2so4-100)/m (%) 1.279. Với: m: Khối lượng nguyên liệu đem phân tích (g) 0, 0014: Số g N (nitơ) tuông đưong với 1 ml H2S04 0,1N Xác định
hàm lượng protein % protein = % N . H
1.280. Dựa vào tỷ lệ nitơ tương đối ốn định trong thành phần cấu tạo của protein đế xác định hệ số protein. Thông thường, hàm lượng nitơ toàn phần trong protein được xem như 16%, khi đó hệ số protein H