Phương pháp thử ựộc tắnh tế bào Ờ khả năng kháng tế bào ung thư

Một phần của tài liệu Nghiên cứu đặc điểm sinh học của vi tảo Ankistrodesmus phân lập từ rừng ngập mặn Xuân Thuỷ, Nam ðịnh và thăm dò khả năng kháng tế bào ung thư biểu mô (Trang 35 - 36)

Dịch chiết tảo ựược gửi ựi phân tắch tại Phòng Thử hoạt tắnh Sinh học, Viện Hóa học, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam theo phương pháp sau:

Xác ựịnh thành phần acid béo

Thử hoạt tắnh kháng tế bào ung thư

Phương pháp thử ựộc tế bào in vitro ựược viện Ung thư Quốc gia Hoa Kỳ (NCI) xác nhận là phép thử ựộc tố tế bào chuẩn nhằm sàng lọc, phát hiện các chất có khả năng kìm hãm sự phát triển hoặc diệt tế bào ung thư ở ựiều kiện in vitro. Dòng tế bào ung thư ở người KB (Humanepidermic carcinoma) ựược cung cấp bởi ATCC là dòng luôn ựược sử dụng trong các phép thử ựộ ựộc tế bàọ Tế bào ung thư ựược nuôi cấy trong môi trường RPMI 1640 có bổ sung thêm 10% huyết thanh phôi bò (FBS) ở ựiều kiện chuẩn (5% CO2; 37oC; ựộ ẩm 98%; vô trùng tuyệt ựối), tế bào phát triển ở pha log sẽ ựược sử dụng ựể thử ựộc tắnh.

Cho 200 ộl dung tắch tế bào ở các pha log nồng ựộ 3 x 104 tb/ml vào mỗi giếng (ựĩa 96 giếng) của môi trường RPMI 1640. Dịch chiết tảo ựược xử lý với tế bào ở các nồng ựộ pha loãng khác nhau sao cho ựạt ựến nồng ựộ cuối cùng là 128 ộg/ml; 32 ộg/ml; 8 ộg/ml; 2 ộg/ml; 0.5 ộg/ml và ủ ở 37oC, 5% CO2 trong 3 ngàỵ Giếng ựiều khiển (ựối chứng) gồm 200 ộl dung dịch tế bào (3 x 104 tb/ml) ủ ở 37oC, 5% CO2 trong 3 ngàỵ Cuối cùng thêm 50 ộl MTT (1 mg/ml pha trong môi trường nuôi cấy không huyết thanh) và ủ tiếp ở 37oC, 5% CO2 trong 4 giờ, loại bỏ môi trường, thêm 100 ộl DMSO, lắc ựều và ựọc kết quả ở các bước sóng 540 nm trên máy spectrophotometer Genios TECAN.

Cách tắnh:

Phần trăm kìm hãm sự phát triển của tế bào (Growth inhibition) = (ODựiều khiển - ODmẫu) / ODựiều khiển

Giá trị IC50 ựược tắnh dựa trên kết quả số liệu phần trăm kìm hãm sự phát triển của tế bào bằng phần mềm máy tắnh table curve [14,16].

Một phần của tài liệu Nghiên cứu đặc điểm sinh học của vi tảo Ankistrodesmus phân lập từ rừng ngập mặn Xuân Thuỷ, Nam ðịnh và thăm dò khả năng kháng tế bào ung thư biểu mô (Trang 35 - 36)