Khi sử dụng CY sẽ làm giảm đáng kể hầu hết tất cả các chỉ số khối lượng, khối lượng lách tương đối, khối lượng tuyến ức tương đối, số lượng bạch cầu và chỉ số thực bào, gây ra sự khác biệt đáng kể đối với nhóm đối chứng sinh học. Khi cho thử Pidotimod Việt Nam dạng bột nguyên liệu và dạng pha chế dung dịch uống trên các đối tượng này có sự thay đổi về các chỉ số cho thấy Pidotimod Việt nam dạng bột nguyên liệu và dạng pha chế dung dịch uống có khả năng tác động lên hệ thống miễn dịch theo chiều hướng làm gia tăng hệ miễn dịch. Và tác dụng của dạng bào chế Pidotimod Việt Nam tương đương với dạng
Về khối lượng chuột, CY gây ức chế miễn dịch, ức chế sự tăng sinh của
hầu hết các tếbào, đặc biệt là tế bào tủy xương và tế bào niêm mạc đường tiêu
hóa, do đó gây ra nhiều tác dụng phụ trên đường tiêu hóa và các mô, cơ quan
khác. Qua quan sát, cho thấy các lô chuột có sử dụng CY thì có phản ứng thường ngày chậm chạp hơn, thường nằm tập chung một chỗ, ít hoạt động và
50
ăn ít hơn so với lô chứng sinh học, một số chuột còn có biểu hiện tiêu chảy ở những ngày cuối của đợt dùng thuốc. Có lẽ vì vậy mà khối lượng chuột ở những nhóm này giảm nhiều so với ban đầu, nhất là lô chứng bệnh lý, trong khi lô chứng sinh học, khối lượng chuột vẫn tăng sau 13 ngày điều trị. Các lô sử dụng pidotimod Việt Nam ớ 2 mức liều và Pidotimod ở dạng pha chế dung dịch uống đều có khối lượng trung bình tăng so với lô chứng bệnh lý. Tuy nhiên mức tăng này chưa trở về con số ban đầu trước khi gây bệnh (so với lô chứng sinh học), có thể do thời gian sử dụng ngắn nên chưa đạt được mức ban đầu.
Kết quả nghiên cứu cho thấy khối lượng chuột ở cả hai mức liều 200mg/kg và 400mg/kg của Pidotimod đều làm tăng khối lượng chuột so với lô chứng bệnh lý và không có sự khác biệt của 2 mức liều này. Đây là căn cứ để khi chọn mức liều 200 mg/kg làm nghiên cứu so sánh sự thay đổi khối lượng giữa 2 nhóm Pidotimod Việt Nam và Pidotimod 121808-62-6 dưới dạng pha chế dung dịch uống. Và khi so sánh giữa lô sử dụng Pidotimod Việt Nam và lô sử dụng Pidotimod 121808-62-6 dưới dạng pha chế dung dịch uống thấy khối lượng chuột tương đương nhau không có sự khác biệt mang ý nghĩa thống kê, điều này chứng tỏ tác dụng của Pidotimod Việt Nam lên khối lượng chuột
tương đương với tác dụng của Pidotimod 121808-62-6 ở dạng pha chế dung
dịch uống. Khi so sánh Pidotimod Việt Nam ở dạng nguyên liệu và dạng pha
chế dung dịch uống thì kết quả cho thấy dạng pha chế dung dịch uống cho sự
biến đổi khối lượng ít hơn là dạng nguyên liệu pha thông thường, tuy nhiên sự
khác biệt không có ý nghĩa thống kê. Do đó ở nghiên cứu này chưa kết luận
được dạng pha chế Pidotimod dung dịch uống có tác dụng tốt hơn trên khối
lượng chuột so với dạng pha chế nguyên liệu thông thường.
Về khối lượng lách tương đối, lô chứng bệnh lý có giá trị thấp nhất 0,465;
còn lô chứng sinh học có giá trị lớn nhất 0,729 và sự khác biệt này có ý nghĩa thống kê điều này cho thấy CY làm giảm khối lượng lách tương đối ở chuột
51
nhắt trắng. Khối lượng lách tương đối giảm do CY làm giảm số lượng bạch cầu, ức chế tủy trắng nên giảm khối lượng của tủy trắng vì vậy làm giảm khối lượng chung của lách. Đối với hai nhóm Pidotimod nguyên liệu Việt Nam ở hai mức liều 200 mg/kg và 400 mg/kg thì không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê về khối lượng lách. Vì vậy khi nghiên cứu só sánh 2 nhóm Pidotimod ở dạng bào chế chỉ lựa chọn mức liều 200 mg/kg để khảo sát, và ở hai nhóm này cũng không có sự khác biệt ý nghĩa thống kê. Điều này cho thấy tác dụng lên khối lượng lách tương đối của hai nhóm là tương đương nhau. Đối với Pidotimod Việt Nam dạng nguyên liệu và dạng pha chế dung dịch uống trên cùng mức liều 200mg/kg cũng không có sự khác biệt ý nghĩa thống kê, mặc dù khối lượng lách tương đối của nhóm pha chế dung dịch
uống là có cao hơn.
Về khối lượng tuyến ức tương đối, nhóm chứng bệnh lý có giá trị thấp nhất 0,083 còn nhóm chứng sinh học có giá trị lớn nhất 0,159, sự khác biệt có ý nghĩa thống kê, điều này chứng tỏ cơ quan lympho này bị teo nhỏ dưới tác dụng của CY. Tuyến ức là cơ quan lympho trung ương, là nơi chín và biệt hóa của lympho T. Tuyến ức teo nhỏ ảnh hưởng đến chức năng miễn dịch, đặc biệt là dòng bạch cầu lympho T và đáp ứng tạo kháng thể phụ thuộc tế bào T (T-dependent antibody response) của dòng tế bào lympho B. Các lô sử dụng pidotimod Việt Nam với cả hai mức liều 200mg/kg và 400mg/kg đều có khối lượng tuyến ức lớn hơn đáng kể so với lô chứng bệnh lý và có sự khác biệt không đáng kể so với lô chứng sinh học. Có thể giải thích rằng, pidotimod làm hạn chế quá trình apoptosis (chết theo chương trình) của các tế bào tuyến ức gây ra bởi CY. Kết quả này cũng được báo cáo trước đây, khi ủ tế bào tuyến ức với các tác nhân gây ra hiện tượng apoptosis như Ca++ - ionophores A23187, genistein, IL-2, … và pidotimod, sau đó định lượng sự phân mảnh ADN. Các kết quả của nghiên cứu trước cũng cho thấy pidotimod có khả năng bảo vệ các tế bào tuyến ức khỏi hiện tượng phân mảnh ADN gây ra bởi
52
các tác nhân trên [39]. Như vậy, có thể nói rằng, Pidotimod Việt Nam dạng nguyên liệu hay dạng bào chế dung dịch uống đều có tác dụng bảo vệ tuyến
ức dưới tác dụng của CY, góp phần làm tăng ĐƯMD ở những cá thể bị suy
giảm miễn dịch. So sánh giữa hai nhóm sử dụng Pidotimod Việt Nam và Pidotimod 121808-62-6 dưới dạng pha chế dung dịch uống ở cùng một mức liều 200 mg/kg thì đều thấy khối lượng tuyến ức tương đối không có sự khác biệt mang ý nghĩa thống kê điều này cho thấy tác động lên tuyến ức của 2 loại pidotimod này là tương đương nhau. So sánh giữa hai nhóm sử dụng Pidotimod Việt Nam dạng nguyên liệu và Pidotimod Việt Nam dưới dạng pha chế dung dịch uống ở cùng một mức liều 200 mg/kg thì cũng cho thấy khối lượng tuyến ức tương đối không có sự khác biệt mang ý nghĩa thống kê. Có thể trên tác động tuyến ức không phải là tác động đặc hiệu nên giữa các nhóm sử dụng Pidotimod chưa có sự khác biệt rõ rệt.
Về số lượng bạch cầu, nhóm chứng bệnh lý có giá trị thấp nhất 2,66 còn nhóm chứng sinh học có giá trị lớn nhất 8,45, sự khác biệt này có ý nghĩa thống kê, điều này cho thấy rõ sự giảm bạch cầu ở lô chứng bệnh lý do sự ức chế tủy xương của CY. Ở các lô điều trị bằng pidotimod làm hạn chế đáng kể sự giảm này, dù chưa trở về mức bình thường như lô chứng sinh học. Có thể giải thích rằng, pidotimod có tác dụng ngăn chặn sự alkyl hóa ADN của các tế bào tủy xương của CY, bảo vệ các tế bào này khỏi hiện tượng chết theo chu trình nhằm duy trì chức năng của chúng trong hệ miễn dịch nói chung và hệ tạo máu nói chung. Cũng có thể, pidotimod tác động trực tiếp lên các tế bào bạch cầu để hạn chế sự alkyl hóa ADN của chính các tế bào này gây ra bởi CY.
Đối với chỉ số thực bào, đây là thông số quan trọng đánh giá chức năng của hệ thống lưới nội mô hay hệ thống các tế bào thực bào đơn nhân. Kết quả cho thấy, trị số này giảm một cách đáng kể ở lô bệnh lý chỉ sử dụng CY để gây suy giảm miễn dịch (giảm 10 lần so với lô chứng sinh học). Có nghĩa là
53
CY làm giảm độ thanh thải của carbon ở lưới nội mô. Còn ở các lô thử dùng pidotimod, chỉ số thực bào tăng đáng kể so với lô chứng bệnh lý cho thấy Pidotimod có tác dụng trên hệ thống lưới nội mô, kích thích hoạt động của các tế bào thực bào chống lại các tác nhân lạ có hại cho cơ thể. Ở nghiên cứu này Nhóm sử dụng Pidotimod nguyên liệu ở mức liều 200 mg/kg và 400 mg/kg không có sự khác biệt ý nghĩa thống kê, kết quả này cũng tương tựnhư nghiên cứu của G. Coppi và cộng sự: chỉ số thực bào của nhóm Pidotimod liều uống 200 mg/kg 0,365 và của nhóm Pidotimod liều uống 400 mg/kg 0,365 [17]. Điều này cho thấy liều dùng 200 mg/kg hay 400 mg/kg có tác
dụng tương đương nhau trên khả năng thực bào. Khi so sánh giữa hai nhóm
Pidotimod Việt Nam và Pidotimod 121808-62-6 dưới dạng pha chế dung dịch (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
uống thi thấy chỉ số thực bào của hai nhóm này không có sự khác biệt ý nghĩa
thống kê, vì vậy có thể kết luận Pidotimod Việt nam tương đương với
Pidotimod 121808-62-6 dưới cùng dạng pha chế dung dịch uống. Khi so sánh chỉ số thực bào với kết quả nghiên cứu của G. Coppi và cộng sự thì thấy chí số có giảm đi 10 lần như nhóm sinh học của nghiên cứu này là 0,046 trong khi của G. Coppi và cộng sự là 0,363 [17]. Tuy nhiên ở một nghiên cứu khác của tác giả A. Jagtap và cộng sự thì chỉ số thực bào của nhóm sinh học là 0,028 [31], sự khác biệt này có thể do việc sử dụng hóa chất khác nhau, pha loãng mực tàu khác nhau tiến hành trong các môi trường và điều kiện khác (thử nghiệm G. Coppi và cộng sự dùng mực tàu với độ pha loãng là 0,32 ml
54
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
Kết luận
Thử nghiệm pidotimod do trường đại học Dược sản xuất ở hai mức liều 200 mg/kg và 400 mg/kg ở chuột nhắt trắng, và thử nghiệm Pidotimod Việt Nam và Pidotimod 121808-62-6 dưới cùng dạng bào chế dung dịch uống thu được những kết quả sau:
- Pidotimod Việt Nam dạng nguyên liệu có tác dụng hồi phục khối lượng chuột, khối lượng lách tương đối, khối lượng ức tương đối, số lượng bạch cầu, chỉ số thực bào trên chuột bị suy giảm miễn dịch bởi CY. Tác dụng của hai mức liều là tương đương nhau với các chỉ số trên.
- Pidotimod Việt Nam và Pidotimod 121808-62-6 dưới cùng dạng bào chế uống ở liều 200 mg/kg đều có tác dụng hồi phục khối lượng chuột, khối lượng lách tương đối, khối lượng ức tương đối, sốlượng bạch cầu, chỉ số thực bào trên chuột bị suy giảm miễn dịch bởi CY. Tác dụng của Pidotimod Việt
Nam là tương đương với Pidotimod 121808-62-6 dưới dạng bào chế dung
dịch uống.
- Pidotimod Việt Nam dạng nguyên liệu và Pidotimod Việt Nam dạng bào chế uống ở liều 200 mg/kg đều làm tăng khối lượng chuột, khối lượng lách tương đối, khối lượng ức tương đối, số lượng bạch cầu, chỉ số thực bào so với lô chứng bệnh lý sự tăng này so với lô chứng bệnh lý có ý nghĩa thống kê (p < 0,05). Tác dụng của Pidotimod dạng pha chế dung dịch uống so với Pidotimod dạng nguyên liệu là tương đương nhau.
Đề xuất và kiến nghị:
Tiếp tục thử nghiệm tác dụng sinh học Pidotimod Việt Nam trên các chỉ số khác như trên tế bào bạch huyết hồng cầu, trên tế bào T, trên hệ miễn dịch dịch thể, trên đại thực bào…Và thử thêm ở các mức liều khác, dạng bào chế khác, công thức bào chế dung dịch uống khác, đối tượng thử nghiệm khác ( ví
55
dụ như trên lâm sàng) để có thể đưa vào bào chế và sản xuất hoạt chất này phục vụ cho công tác y tế.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tài liệu tiếng Việt
1. Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, nhà xuất bản Y học, PL-87.
2. Bộ Y tế (2009), Dược thư Quốc gia Việt Nam, nhà xuất bản Y học, 391 – 399.
3. Đào Thị Kim Chi (1984), Tổng hợp futumin, một số peptidyl futumin và
thăm dò tác dụng kích thích miễn dịch không đặc hiệu của chúng, Luận án tiến sỹDược học - Đại học Dược Hà Nội, 18 - 24.
4. Đỗ Văn Dũng (2001), Căn bản thống kê y học, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh, 11 - 15.
5. Văn Đình Hoa, Nguyễn Ngọc Lanh (2007), Sinh lý bệnh và miễn dịch – phần miễn dịch học, nhà xuất bản Y học.
6. Nguyễn Trang Thúy (2006), Nghiên cứu tác dụng kích thích miễn dịch của dịch chiết toàn phần hai loài nấm Linh Chi Canoderma Applanatum (Pers.)Pat,; Canoderma Lucidun (Leyss.ExFr.) trên chuột nhắt trắng, nhà xuất bản Y học.
...
Tài liệu tiếng Anh
7. Acute respiratory infections (1998), “the forgotten pandemic”, Bull World Health Organ, 76:101–103.
8. Aivazis V. Et al (2002), “Clinical evaluation and changes of the respiratory epithelium function after administration of Pidotimod in Greek children with recurrent respiratory tract infections”, Minerva Pediatr, 54:315–319 9. Auteri A. et al (1992), “Effect of Pidotimod, a new immunostimulating
agent, on some aspects of immune response”, In vitro study,Pharmacol Res, 26:196–197. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
10. Benetti G. P. et al (1994), “Ex vivo evaluation of Pidotimod activity on cell – mediated immunity”, Arzneimittel Forschung Drug Research, 44 (12a), 1476 – 1479.
11. Biozzi G. (1953), “Quantitative study of the granulopectic activity of the reticulo-endothelial system”, the British journal of experimental pathology, 34 (4), 441 – 457.
12. Cantarini L. et al , “ Henoch-Schönlein purpura associated with Pidotimod therapy”, Clin Exp Rheumatol 2008, 26:S152.
13. Caramia G. et al (1994), “Efficacy and safety of pidotimod in the treatment of recurrent respiratory infections in children”, Arzneimittel Forschung Drug Research, 44 (12a), 1480 – 1484.
14. Carta S. et al (2013), “Modulation of airway epithelial cell functions by Pidotimod: NF-kB cytoplasmatic expression and its nuclear translocation are associated with an increased TLR-2 expression”, Ital J Pediatr, 39:29. 15. Chiarenza A. et al (1994), “Effects of pidotimod on the immune and the neuroendocrine system in the aging rat”, Arzneimittel Forschung Drug Research, 44 (12a), 1437 – 1440.
16. Clemente E. et al (1994), “Therapeutic efficacy and safety of pidotimod in the treatment of urinary tract infections in children”, Arzneimittel Forschung Drug Research, 44 (12a), 1490 – 1494.
17. Coppi G., et al (1994), “Experimental immunological screening tests on pidotimod”, Arzneimittel Forschung Drug Research, 44 (12a), 1411 – 1416.
18. Coppi G., Silingardi S. (1994), “Pharmacokinetics of pidotimod in rats and dogs”, Arzneimittel Forschung Drug Research, 44 (12a), 1460 – 1464.
19. Coppi G., Falcone A., Manzardo S. (1994), “Protective effects of pidotimod against experimental bacterial infections in mice”,
Arzneimittel Forschung Drug Research, 44 (12a), 1417 – 1421.
20. Coppi G. et al (1994), “Toxicological evaluation of pidotimod”,
Arzneimittel Forschung Drug Research, 44 (12a), 1448 – 1453.
21. Crimella T. et al (1994), “Analytical and chemical profile of pidotimod”,
Arzneimittel Forschung Drug Research, 44 (12a), 1405 – 1410.
22. D’Angelo L. et al (1994), “ Effect of food on the bioavailability of Pidotimod in healthy volunteers”, Arzneimittelforschung, 44:1473–1475 23. Di Marco R. et. al. Increased rate of survival in Streptococcus
pneumoniae-infected rats treated with the new immunomodulator Pidotimod, 1992, Scand J Infect Dis. 1992;24(6):821-3.
24. Dianzani C. et al (1994), “In vivo antiviral effects of pidotimod”,
Arzneimittel Forschung Drug Research, 44 (12a), 1431 – 1433.
25. Ding AH. Nathan C.F., Stuehr D.J. (1988), “Release of reactive nitrogen intermediates and reactive oxygen intermediates from mouse peritoneal macrophages. Comparison of activating cytokines and evidence for independent production”, J Immunol, 141 (7), 2407-2412.
26. Giagulli C (2009), “Pidotimod promotes functional maturation of dendritic cells and displays adjuvant properties at the nasal mucosa level.”, Int Immunopharmacol. 9(12):1366-73
27. Halpernm B. N. et al, (2011), “Review article the role and function of the reticulo-endothelial system in immunological processes”, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 11 (1), 321 – 328.
28. Hassain A., Shadma W., Maksood A., Ansari S.H. (2013), “Protective
effects of Picrorhiza kurroa on cyclophosphamide-induced
29. Hu S. Et al (2014), “The regulatory peptide pidotimod facilitates M2 macrophage polarization and its function.”, Amino Acids, 46(5):1177-85 30. Huo XX. Et al (2013), “Preventive effect of pidotimod on reactivated
toxoplasmosis in mice.”, Parasitol Res., 112(8):3041-51.