a) Phương pháp giữ giống trên thạch nghiêng:
Pha môi trường thạch thường (theo mục 2.3.1), khuấy đều, đun cho đồng nhất. Chia môi trường vào trong các ống nghiệm (5 – 6ml/ống), nút kín. Hấp tiệt khuẩn ở điều kiện 1atm/20 phút. Sau khi tiệt khuẩn xong, đặt nghiêng các ống nghiệm và để nguội cho thạch đông lại. Tiến hành cấy truyền từ ống giống gốc sang ống môi trường mới theo hình ziczac. Đặt các ống đã cấy giống vào tủ ấm, ủ ở
370C/24h. Bảo quản các ống giống trong tủ lạnh ở 4 – 50C.
Việc cấy truyền được thực hiện 1 – 2 tháng/lần [6], [14].
b) Phương pháp nhân giống trong bình nón:
Pha 100ml môi trường canh thang MT 1 cho vào bình nón 250ml, nút kín. Hấp tiệt khuẩn môi trường ở điều kiện 1atm/20 phút. Sau khi tiệt khuẩn, để môi trường nguội xuống nhiệt độ phòng, dùng que cấy vô khuẩn lấy một vòng que cấy
trong ống giống cấy vào môi trường. Nuôi trên máy lắc ở 370C/24h, tốc độ lắc 110
vòng/phút [6], [14].
Thu dịch sinh khối: Ly tâm dịch sinh khối tế bào B. subtilis natto với tốc độ
4000 vòng/phút trong 15 phút ở nhiệt độ phòng. Loại bỏ phần dịch trong ở trên đến khi còn 10ml dịch. Votex phần dịch này thu được dịch sinh khối.
c) Phương pháp lên men hiếu khí với các hạt cố định:
Pha 50ml môi trường lên men (theo phần 2.1.3) cho vào bình nón 250ml, nút kín. Hấp tiệt khuẩn môi trường ở điều kiện 1atm/20 phút. Sau khi tiệt khuẩn, để môi
trường nguội xuống dưới 400
C, cấy hạt đã tạo ra sang các môi trường lên men với tỷ
lệ cấy truyền là 10% khối lượng hạt tạo được. Nuôi VSV trên máy lắc ở 370C, tốc
18