- Cho 3 thể tích CH3OH vào 4 thể tích H2O và cũng để ở tầng nước đá
ngày sau mũi tiêm cuối cùng
3.4 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ CHẤT LƢỢNG IgG SẢN XUẤT Bảng 3.7: Kết quả các chỉ tiêu chất lƣợng IgG
Bảng 3.7: Kết quả các chỉ tiêu chất lƣợng IgG
Loạt thí nghiệm KẾT QUẢ Vật lí Vơ trùng Đặc hiệu HGKT Tinh khiết Hàm lƣợng protein TN1 Dung dịch cĩ màu trắng trong suốt, khơng cĩ cặn Đạt ( +++ ) 1/1280 Một dải ngưng kết 12,18 TN2 Đạt ( +++ ) 1/1280 Một dải ngưng kết 12,58
Kết quả ở bảng 3.7 cho thấy:
Vật lí:
Cả 2 lần thí nghiệm đều thu được dung dịch kháng thể tinh chế cĩ màu trắng trong suốt, khơng cĩ lắng cặn.
Vơ trùng:
Kiểm tra trên mơi trường thioglycolate ở nhiệt độ 22 – 250C và 370C sau 14 ngày cả 2 lần thí nghiệm đều khơng thấy cĩ vi sinh vật mọc.
Tính đặc hiệu:
+ Thí nghiệm 1: dung dịch kháng thể tạo ngưng kết đặc hiệu với KN EV sống, hạt ngưng kết thấy được rõ ràng bằng mắt thường trong thời gian 1 phút. + Thí nghiệm 2: tạo được ngưng kết đặc hiệu với KN EV sống giống như thí nghiệm 1, tuy nhiên thời gian tạo ngưng kết cĩ nhanh hơn khoảng 30 giây. Hiệu giá kháng thể:
Cả 2 lần thí nghiệm IgG tinh chế đều cĩ HGKT là 1/1280 Độ tinh khiết:
Cả 2 lần tinh chế thử nghiệm kháng thể IgG thu được tạo một dải ngưng kết khi điện di trên SDS – page.
Hàm lượng protein:
+ Thí nghiệm 1: IgG tinh chế cĩ hàm lượng protein là 12,18 mg/ml. + Thí nghiệm 2: IgG tinh chế cĩ hàm lượng protein là 12,58 mg/ml.
Sắc ký ái lực (affinity chromatography) sử dụng ái lực giữa cấu tử gắn (ligand) và protein cần tách. Khi tiến hành sắc ký, protein cần tách sẽ gắn với giá thể trong khi các protein khác sẽ rửa trơi ra khỏi cột. Sau khi rửa sạch tạp chất, protein cần tách được phản hấp phụ bằng các chất cạnh tranh như cấu tử tự do, hay bằng các chất cĩ khả năng phá vỡ tương tác. Trong quá trình tinh chế IgG kháng dịch hạch, những phân tử IgG sẽ gắn đặc hiệu lên cột, do đĩ những phân tử cịn lại sẽ chạy qua cột. Vì vậy khi rửa cột, kết quả thu được chỉ cĩ các phân tử IgG và kết quả này phù hợp với cơng trình của một số tác giả đã cơng bố trước đây [ 24 ].
Từ các kết quả ở bảng 3.7 chúng tơi cĩ nhận xét:
IgG mà chúng tơi tinh chế bằng phương pháp sắc kí ái lực đạt các tiêu chuẩn vật lí, vơ trùng, độ đặc hiệu, hàm lượng protein, hiệu giá kháng thể và độ tinh khiết.