- Cho 3 thể tích CH3OH vào 4 thể tích H2O và cũng để ở tầng nước đá
ngày sau mũi tiêm cuối cùng
3.3.1 Kết quả tinh chế IgG với metanol
Bảng 3.5: Kết quả chất lƣợng của IgG tinh chế với metanol
Loạt thí nghiệm
Kết quả
Vật lí Tính đặc hiệu Thời gian ngƣng
kết ( phút) TN1 Dung dịch cĩ màu trắng hơi đục, cĩ một ít kết tủa trắng ngà ( ++ ) 3 TN2 ( ++±) 2 TN3 ( ++ ) 3
Từ kết quả bảng 3.5 cho thấy:
Vật lí:
Cả 3 thí nghiệm IgG thu được là một dung dịch màu trắng hơi đục và cĩ một ít kết tủa trắng ngà.
Tính đặc hiệu:
+ Thí nghiệm 1 và 3: sản phẩm IgG thu được tạo ngưng kết với kháng nguyên EV khi thực hiện phản ứng ngưng kết trên lam kính, hạt ngưng kết thấy được rõ bằng mắt thường, mức độ tạo hạt khơng nhiều ( ++ ) và xuất hiện chậm trong khoảng thời gian 3 phút.
+ Thí nghiệm 2: sản phẩm IgG thu được tạo ngưng kết với KN EV nhiều hơn ( ++±) và nhanh hơn trong khoảng thời gian 2 phút và cĩ thể thấy rõ bằng mắt thường.
Dùng metanol để tinh chế protein là một phương pháp phổ biến, rẻ tiền và dễ thực hiện ở mọi phịng thí nghiệm. Do vậy mà phương pháp này được sử dụng khá nhiều và trong giới hạn của luận văn này chúng tơi đã dùng metanol lạnh để tinh chế KHT dịch hạch thu IgG. Tuy nhiên trong quá trình thực hiện tinh chế, IgG thu được lại chưa đạt yêu cầu cịn một số hạn chế về chất lượng. Nguyên nhân dẫn đến chất lượng IgG tinh chế khơng đạt yêu cầu cĩ thể là do trong quá trình tinh chế, metanol đã làm biến tính protein nên IgG thu được khơng phải là chất lỏng trong suốt màu trắng tinh mà là một dung dịch màu trắng ngà, hơi đục, bị biến tính một phần và khơng tan hết trong dung dịch đệm. Chính vì thế mà chúng tơi khơng tiến hành đánh giá các chỉ tiêu khác như hàm lượng protein ,độ tinh khiết và HGKT của IgG.
Từ các kết quả ở bảng 3.5 chúng tơi cĩ nhận xét:
Tinh chế IgG bằng metanol lạnh cĩ thu được kháng thể IgG cĩ tính đặc hiệu tuy nhiên kháng thể thu được chưa đạt yêu cầu vật lí do trong dung dịch cĩ màu trắng hơi đục, IgG tinh chế bị biến tính một phần, khơng tan hết trong dung dịch hồn nguyên. Do vậy chúng tơi tiếp tục tiến hành tinh chế KHT thu IgG bằng một phương pháp khác nhằm đạt chất lượng cao hơn.