Trong nghiên cứu này, cặp mồi IL6–F và IL6–R đã thiết kế (sản phẩm
khuếch đại 289 bp) được sử dụng để kiểm tra sự có mặt gen IL–6 trong các mẫu tế
bào sau chuyển nhiễm. Đồng thời, cặp mồi khuếch đại đoạn ADN kích thước 321
bp trong gen ribosome 18S cũng được sử dụng làm chứng nội. Kết quả điện di sản
phẩm PCR các mẫu tế bào chuyển gen thể hiện ở Hình 21. Các mẫu tế bào chuyển
gen xuất hiện cả hai băng có kích thước 289 bp (IL–6) và 321 bp (18S), trong khi mẫu đối chứng chỉ quan sát được một băng duy nhất của gen 18S.
Hình 21. Kết quả phân tích PCR các mẫu tế bào chuyển gen
(18S) Sản phẩm khuếch đại gen 18S; (IL–6) Sản phẩm khuếch đại gen chuyển IL–6; (–) Đối chứng âm; (+) Đối chứng dương; (M) Thang chuẩn; (ĐC) Mẫu tế bào đối chứng không được chuyển nhiễm; (E1101, E1102, E1203) Các mẫu tế bào được chuyển gen.
Để kiểm tra gen chuyển có được duy trì ổn định qua các thế hệ tế bào hay không, chúng tôi thực hiện phân tích PCR các mẫu tế bào chuyển gen qua mỗi lần
cấy chuyển. Kết quả kiểm tra cho thấy, sau hơn 20 ngày nuôi cấy với 3 lần cấy
chuyển, gen chuyển vẫn được duy trì ổn định trong hệ gen của cESCs. Tất cả các
mẫu tế bào chuyển gen và trải qua các lần cấy chuyển đều cho kết quả dương tính
Hình 22. Kết quả phân tích PCR các mẫu tế bào qua các lần cấy chuyển
(18S) Sản phẩm khuếch đại gen 18S; (IL–6) Sản phẩm khuếch đại gen chuyển IL–6; (–) Đối chứng âm; (+) Đối chứng dương; (M) Thang chuẩn; (ĐC) Mẫu tế bào đối chứng không được chuyển nhiễm; (E1203: F1, F2, F3) Mẫu tế bào E1203 trải qua lần lượt 3 lần cấy chuyển.
Vector pLenti6/V5-DEST không thể nhân lên trong tế bào chất của cESCs.
Bên cạnh tâm tái bản trong E. coli, vector chứa tâm tái bản của Simian vacuolating virus 40 (SV40 origin), hoạt động trên các loại tế bào người và khỉ biểu hiện mạnh
kháng nguyên T lớn SV40 (như COS–7, 293T) và một số dòng tế bào chuột (như
CHO) [70]. Đến nay chưa có báo cáo nào về hoạt động của SV40 origin trên tế bào những loài khác. Ngoài ra, cESCs được phân tích PCR đã trải qua quá trình nuôi cấy dài ngày, ADN được tách bằng kit cung cấp bởi hãng Roche đặc hiệu với ADN
hệ gen. Vì vậy, bước đầu có thể khẳng định băng 289 bp được phát hiện trong các phản ứng PCR do gen IL–6đã chèn vào ADN trong nhân tế bào.