phát triển của chồi bên in vitro [19, 21]:
Vật liệu:
Mẫu cấy: chồi ngọn và các đốt thân 2, 3, 4 và 5 lấy từ cây in vitro 3 tuần tuổi phát triển tốt, thân thẳng, khỏe.
Mơi trường nuơi cấy:
Mơi trường MS bổ sung đường ăn 30 g/l, agar 7.0 g/l và BA 0.3 mg/l và dịch chiết tảo Spirulina nồng độ 0.4, 0.6, 0.8 g/l.
Điều kiện nuơi cấy:
Cường độ ánh sáng: 2500 ± 200 lux
Chu kỳ quang sáng 16 giờ/ngày
Nhiệt độ: 25 ± 20C
Độ ẩm: 70 ± 5% Chỉ tiêu theo dõi:
Số lượng chồi tạo thành.
Chiều cao chồi.
Khả năng sinh trưởng của chồi biểu hiện qua:
Thời gian phát sinh chồi.
Kích thước chồi.
Khoảng cách giữa các đốt.
Đường kính thân.
27
Dịch chiết tảo thu được bằng phương pháp phá vỡ tế bào [22]. Tiến hành phá vỡ tế bào tảo bằng 3 phương pháp:
3.3.8.1 Sử dụng sĩng siêu âm: Phương pháp:
Mơi trường MS bổ sung : BA nồng độ 0.3 mg/l, đường ăn 30g/l, agar 7g/l và dịch chiết tảo với tỷ lệ sau:
Bảng 3.3: Tỷ lệ dịch chiết tảo Spirulina sp. bổ sung vào mơi trường Chất hữu cơ Thời gian phá
vỡ tế bào
Mơi trường cĩ bổ sung tảo
(1) (2) (3) Tảo Spirulina (% v/v) 5‟ 10 15 20 6‟ 10 15 20 7‟ 10 15 20
Bột tảo Spirulina được pha vào nước theo tỷ lệ 1g tảo/25 ml nước cất, tiến hành phá vỡ tế bào tảo bằng sĩng siêu âm trong vịng 5 – 6 – 7 phút rồi lọc qua giấy lọc loại bỏ cặn, sau đĩ bổ sung vào mơi trường nuơi cấy.
Hình 3.2: Phương pháp phá vỡ tế bào tảo bằng sĩng siêu âm. Bột tảo Sprirulina sp. Lọc Máy phá vỡ tế bào bằng sĩng siêu âm Dịch chiết tảo Nước cất
28 3.3.8.2 Sử dụng enzyme Viscozyme: Phương pháp:
Mơi trường MS bổ sung : BA nồng độ 0.3 mg/l, đường ăn 30g/l, agar 7g/l và dịch chiết tảo với tỷ lệ sau:
Bảng 3.4: Tỷ lệ dịch tảo Spirulina sp. bổ sung vào mơi trường (1)
Chất hữu cơ Mơi trường cĩ bổ sung tảo (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
(1) (2) (3)
Tảo Spirulina (% v/v) 10 15 20
Bột tảo Spirulina được pha vào nước theo tỷ lệ 1g tảo/25 ml nước cất, tiến hành
phá vỡ tế bào tảo bằng phương pháp bổ sung Viscozyme và đưa về các điều kiện thích hợp cho việc phá vỡ tế bào (pH = 4.5, nhiệt độ ở 500C trong 60 phút)
Hình 3.3: Phương pháp phá vỡ tế bào tảo bằng enzyme. Bột tảo Spirulina sp. pH=4.5, t0=500C, t=60 phút Lọc Dịch chiết tảo Nước cất Viscozyme
29 3.3.8.3Phương pháp sock nhiệt: Phương pháp:
Mơi trường MS bổ sung : BA nồng độ 0.3 mg/l, đường ăn 30g/l, agar 7g/l và dịch chiết tảo với tỷ lệ sau:
Bảng 3.5: Tỷ lệ dịch tảo Spirulina sp. bổ sung vào mơi trường
Chất hữu cơ Mơi trường cĩ bổ sung tảo
(1) (2) (3)
Tảo Spirulina (% v/v) 10 15 20
Bột tảo Spirulina cân và pha vào nước theo tỷ lệ 1g tảo/25 ml nước cất, cho vào chai thủy tinh, thực hiện quá trình sock nhiệt ở 1200C
Hình 3.4: Phương pháp phá vỡ tế bào tảo bằng shock nhiệt. Bột tảo Spirulina sp. Shock nhiệt (120 oC, 5 phút) Lọc Dịch chiết tảo Nước cất
30
CHƢƠNG 4:
31