nước dừa, khoai tây, bánh dầu đến khả năng nhân nhanh chồi và sự sinh trưởng của giống lan Dendrobium mini lai
Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ vitamin lên sự tăng sinh chồi trong môi trường lỏng lắc
Vật liệu
Protocorm từ thí nghiệm 3.
Môi trường nuôi cấy: môi trường MS có bổ sung 30g sucrose; 30g khoai tây; 20% nước dừa; chất điều hòa sinh trưởng NAA và BA (nồng độ tối ưu ở thí nghiệm
3); vitamin (MS tổng) với nồng độ khác nhau.
Bố trí thí nghiệm
Thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên, gồm 6 nghiệm thức. Protocorm từ
bình 6 mẫu. Tổng số bình là 18 bình. Tổng số mẫu là 108 mẫu. Số lần lặp lại thí nghiệm là 3 lần. Quan sát và ghi nhận kết quả.
Hệ thống tế bào được đặt trên máy lắc vòng với vận tốc 150 vòng/phút, điều kiện
chiếu sáng chiếu sáng 2800 ± 200 lux, nhiệt độ ± 2o
C, ẩm độ 70% ± 2o
C.
Bảng 2.4. Nồng độ các chất điều hòa sinh trưởng thực vật và vitamin bổ sung vào các môi trường ảnh hưởng đến sự tăng sinh chồi
Nghiệm thức BA (mg/l) NAA (mg/l) Vitamin tổng (mg/l)
1 0 0 0 2 3 0,5 0 3 0 0 2 4 0 0 4 5 0 0 6 6 0 0 8
Chỉ tiêu theo dõi
Tỷ lệ sống: tổng số mẫu sống/ tổng số mẫu cấy.
Thời gian tăng sinh protocorm.
Màu sắc mẫu: xanh/vàng/nâu.
Thí nghiệm 6: Ảnh hưởng của bánh dầu đến khả năng sinh trưởng chồi của giống lan Dendrobium mini lai
Vật liệu
Chồi cây in vitro 1 – 1,5 cm; 2 – 3 lá.
Môi trường nuôi cấy: môi trường MS có vitamin, không có hormone, bổ sung
30g sucrose; 0,5g/l than hoạt tính và bánh dầu được xử lý khác nhau. pH môi trường
điều chỉnh mức 5,8.
Bố trí thí nghiệm
Thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên, gồm 12 nghiệm thức. Chồi cây in
vitro được nuôi cấy trên các môi trường. Mỗi nghiệm thức 3 bình, mỗi bình 6 mẫu.
Tổng số bình là 36 bình. Tổng số mẫu là 156 mẫu. Số lần lặp lại thí nghiệm là 3 lần.
Bảng 2.5. Nồng độ bánh dầu bổ sung vào các môi trường ảnh hưởng đến sự sinh trưởng chồi lan Dendrobium mini lai
Nghiệm thức Bánh dầu (mg/l) 1 50 T 2 100 T 3 150 T 4 200 T 5 50 XL 6 100 XL 7 150 XL 8 200 XL 9 50 XLVS 10 100 XLVS 11 150 XLVS 12 200 XLVS
Ghi chú: Bánh dầu thô ký hiệu: T
Bánh dầu xử lý ký hiệu: XL
Bánh dầu xử lý vi sinh ký hiệu: XLVS
+ Bánh dầu thô (T): lọc bỏ tạp chất, xay nhuyễn và trữ trong tủ lạnh nhiệt độ 80 -
100C, cân 50g bánh dầu cho vào bình với 500ml nước cất, khi hút dung dịch lắc đều
[4].
+ Bánh dầu đã qua xử lí (XL): Bánh dầu thô lọc bỏ tạp, xay nhuyễn bánh dầu, trữ
tủ lạnh, cân 50g bánh dầu, cho vào bình thể tích 500ml theo công thức10ml HCl 2%
và 490ml nước cất, hấp bình dung dịch trên trong điều kiện 1210
C, 1atm trong 15 phút, lập lại 2 lần liên tiếp, khi hút dung dịch pha môi trường cần lắc đều [4].
+ Bánh dầu xử lý vi sinh (XLVS): Bánh dầu thô lọc bỏ tạp, xay nhuyễn bánh dầu,
cân 50g bánh dầu, cho vào bình với 500ml nước cất, hấp bình dung dịch trên trong
điều kiện 1210C, 1atm trong 15 phút. Sau 7 ngày, cho Bacillus subtilis vào bình, để vi
sinh hoạt động tự nhiên, điều kiện nhiệt độ 28 ± 20
C trong 10 ngày. Lọc bánh dầu đã
Chỉ tiêu theo dõi
Tỷ lệ nhân chồi. Chiều cao cây. Số lá.
Hình thái màu sắc lá.
Thời gian theo dõi chỉ tiêu: 7, 21, 35, 49 ngày sau cấy.
Thí nghiệm 7: Ảnh hưởng của cơm dừa, bánh dầu đến khả năng sinh trưởng chồi của giống lan Dendrobium mini lai
Vật liệu
Chồi cây in vitro 1 – 1,5 cm; 2 – 3 lá.
Môi trường nuôi cấy: môi trường MS có vitamin, không có hormone, có bổ sung 20% nước dừa, 0,5g than hoạt tính, 30g sucrose, 30g khoai tây, hàm lượng bánh dầu tối ưu ở thí nghiệm 6, thành phần cơm dừa theo công thức thí nghiệm. pH môi trường điều chỉnh mức 5,8.
Bố trí thí nghiệm
Chồi cây in vitro được nuôi cấy trên các môi trường theo công thức thí nghiệm.
Thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên, gồm 6 nghiệm thức, 3 lần lặp lại. Mỗi
nghiệm thức cấy 3 bình, mỗi bình 6 chồi, tổng số bình là 18 bình, tổng số mẫu là 108
mẫu.
Bảng 2.6. Nồng độ cơm dừa và bánh dầu bổ sung vào các môi trường ảnh hưởng đến sự sinh trưởng chồi
Nghiệm thức Cơm dừa (mg/l) Bánh dầu (mg/l)
1 0 0 2 10 HLTUTN6 3 20 HLTUTN6 4 30 HLTUTN6 5 40 HLTUTN6 6 50 HLTUTN6
Ghi chú: HLTUTN6: Hàm lượng bánh dầu tối ưu của thí nghiệm 6. Chỉ tiêu theo dõi
Tổng số chồi tạo thành. Tỷ lệ nhân chồi.
Chiều cao chồi. Số lá.
Hình thái màu sắc lá.
Thời gian theo dõi chỉ tiêu: 7, 21, 35, 49 ngày sau cấy.
Thí nghiệm 8: Ảnh hưởng của cơm dừa, bánh dầu đến sinh trưởng của giống lan Dendrobium mini lai ở giai đoạn tạo cây con hoàn chỉnh
Vật liệu
Cây lan Dendrobium mini lai in vitro có chiều cao từ 2 - 2,5cm; 2 – 3 lá.
Môi trường nuôi cấy: môi trường MS có vitamin, không có hormone, có bổ sung 20% nước dừa, 0,5g than hoạt tính, 30g sucrose, 30g khoai tây, hàm lượng bánh dầu tối ưu ở thí nghiệm 6, thành phần cơm dừa theo công thức thí nghiệm. pH môi trường điều chỉnh mức 5,8.
Bố trí thí nghiệm
Thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên, gồm 6 nghiệm thức 3 lần lặp lại.
Mỗi nghiệm thức cấy 3 bình, mỗi bình 6 chồi, tổng số bình là 18 bình, tổng số mẫu là
108 mẫu. Quan sát kết quả và ghi nhận.
Bảng 2.7. Nồng độ cơm dừa và bánh dầu bổ sung vào các môi trường ảnh hưởng đến sự sinh trưởng lan Dendrobium mini lai ở giai đoạn tạo cây hoàn chỉnh
Nghiệm thức Cơm dừa (mg/l) Bánh dầu (mg/l)
1 0 0 2 10 HLTUTN6 3 20 HLTUTN6 4 30 HLTUTN6 5 40 HLTUTN6 6 50 HLTUTN6
Ghi chú: HLTUTN6: Hàm lượng bánh dầu tối ưu của thí nghiệm 6. Chỉ tiêu theo dõi
Số rễ. Số lá.
Hình thái màu sắc lá.
Thời gian theo dõi chỉ tiêu: 7, 21, 35, 49 ngày sau cấy.