Thí nghiệm 1: Khảo sát phương pháp khử trùng mẫu
Vật liệu
Chồi non của cây lan con Dendrobium mini lai ngoài nhà lưới cao 3 – 10 cm. Môi trường nuôi cấy: MS bổ sung 30g/l sucrose, 30g/l khoai tây, 20% nước dừa, 6,5g/l agar, 0,5g/l than hoạt tính. pH điều chỉnh ở mức 5,8.
Hóa chất khử trùng: xà phòng, cồn 70o, nước cất vô trùng. Bố trí thí nghiệm
Thí nghiệm gồm 8 nghiệm thức. Mỗi nghiệm thức cấy 3 bình, mỗi bình 6 mẫu. Tổng số bình là 24 bình. Tổng số mẫu là 144 mẫu. Số lần lặp lại thí nghiệm là 3 lần.
Trong các nghiệm thức, thời gian khử trùng với cồn 70o là không thay đổi; khử
trùng với nồng độ Javenvà thời gian khử trùng là khác nhau.
Bảng 2.1. Nồng độ Javen và thời gian khử trùng mẫu
Nghiệm thức Nồng độ Javen Thời gian
1 60% 10 phút
2 60% 12 phút
3 60% 14 phút
5 70% 10 phút
6 70% 12 phút
7 70% 14 phút
8 70% 16 phút
Chồi lan non rửa bằng xà phòng, cồn 70o
,Javen và rửa lại bằng nước cất vô trùng
4-5 lần; sau đó cắt bỏ phần dập, tách bỏ cuống lá. Các lát mỏng khoảng 2 - 3 mm cắt
từ mẫu sạch sau đó được đặt trên môi trường nuôi cấy.
Quy trình khử trùng chung được thực hiện theo sơ đồ sau:
Chuyển mẫu vào tủ cấy vô trùng
Chồi lan non ngoài vườn sạch bệnh cao từ 3 – 10 cm
Cắt tận gốc, rửa dưới vòi nước sạch bụi đất Cắt bớt lá và bao lá của chồi
Lắc với xà phòng Lifebuoy trong 10 phút
Rửa sạch xà phòng bằng nước cất Lắc với nước cất vô trùng 3 lần
Lắc với cồn 70o
trong 1 phút
Lắc với nước cất vô trùng 3 - 4 lần
Lắc với Javen với nồng độ và thời gian khác nhau
Hình 2.1. Sơ đồ quy trình khử trùng mẫu Chỉ tiêu theo dõi
Tỉ lệ mẫu sống (%)