Thí nghiệm được thực hiện làm 3 đợt: + Đợt 1: cấy giống từ ngày 15/ 02/ 2011. + Đợt 2: cấy giống từ ngày15/ 06/ 2011 + Đợt 3: cấy giống từ ngày 15/ 09/ 2011.
2.4. Nội dung nghiên cƣ́u
- Tạo một số môi trường dinh dưỡng khác nhau từ giá thể mùn cưa tạp.
- Nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ môi trường đến sự sinh trưởng và phát triển của bốn chủng Linh chi
+ Nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ đến thời gian hệ sợi lan phủ . + Nghiên cứu sự sinh trưởng , phát triển hệ sợi của bốn chủng Linh chi trên hai công thức dinh dưỡng khác nhau.
Lưu Thị Minh Huệ 32 K34A Sinh_KTNN
- Nghiên cứu ảnh hưởng của độ ẩm nguyên liệu đến sự sinh trưởng của hệ sợi.
- Theo dõi tỷ lệ nhiễm mốc.
- Nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ, độ ẩm môi trường đến sự sinh trưởng và phát triển quả thể của bốn chủng Linh chi trên hai công thức dinh dưỡng khác nhau.
- Nghiên cứu sự hình thành và phát triển quả thể của bốn chủng Linh chi trên hai công thức dinh dưỡng khác nhau.
- Nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ , độ ẩm môi trường đến năng suất của bốn chủng nấm Linh chi.
- Nghiên cứu ảnh hưởng của hai công thức dinh dưỡng khác nhau đến năng suất của bốn chủng Linh chi.
2.5. Chuẩn bị điều kiện nuôi trồng
2.5.1. Nguyên liệu
Mùn cưa tạp. Yêu cầu mùn cưu phải khô (độ ẩm nhỏ hơn 20%) không bị mốc, không có tinh dầu, không qua xử lý hóa chất làm trắng hoặc sạch.
Phụ gia: có bột nhẹ CaCO3, cám gạo, bột ngô nghiền, nước vôi, đường trắng, MgSO4.
2.5.2. Nhà nuôi trồng nấm
Nhà nuôi trồng nấm bao gồm hai phòng chính: phòng ươm sợi và phòng chăm sóc thu hái quả thể.
Phòng ươm sợi phải đảm bảo những yêu cầu sau: sạch sẽ, nhiệt độ 20 – 30oC, độ ẩm từ 75% - 85%, thoáng, ánh sáng yếu, có hệ thống giàn giá để đặt bịch, giữa các giàn giá phải có lối đi để kiểm tra, theo dõi bịch.
Phòng chăm sóc thu hái yêu cầu: sạch sẽ, thoáng mát, ánh sáng khuyếch tán (ở mức đọc sách) chiếu đều khắp phòng, kín gió, nhiệt độ thích
Lưu Thị Minh Huệ 33 K34A Sinh_KTNN hợp 220
C-300C, độ ẩm đạt 80 – 90%. Trong nhà có hệ thống giàn giá để tăng diện tích sử dụng.
Trước và sau mỗi đợt nuôi trồng cần vệ sinh thật tốt trong và xung quanh khu vực nuôi trồng nấm. Nếu có điều kiện có thể tiến hành đốt bột lưu huỳnh xông nhà trồng nấm hay phun foocmol với nồng độ khoảng 0,5% trước khi đưa nguyên liệu vào trồng nấm một tuần.
2.5.3. Các thiết bị và vật tư khác
Chuẩn bị túi nilon PE hoặc PP có kích thước 25 × 35 cm, cỡ nút và cổ nút chịu nhiệt, bông, chun buộc miệng túi.
Lò hấp thủ công dạng mái vòm.
Dụng cụ cấy giống gồm: que cấy bằng kim loại,panh kẹp kim loại, đèn cồn, cồn, diêm, khay đựng kim loại, giấy báo,chun buộc, bốc (box) phải đảm bảo sạch sẽ, thoáng khí và được khử trùng thường xuyên.
2.6. Phƣơng pháp nghiên cƣ́u
2.6.1. Phương pháp nuôi trồng Linh chi
2.6.1.1. Xử lý nguyên liệu
Mùn cưa của tạp không bị mốc, được tạo ẩm bằng nước vôi trong có độ pH = 12 – 13. Tưới phun tạo ẩm cho nguyên liệu, độ ẩm tốt nhất đạt 60 - 65%.
Sau đó ủ mùn cưa thành đống, ủ khoảng 30 – 40 ngày thì đảo nguyên liệu. Yêu cầu của đống ủ là phải nén đống ủ càng chặt càng tốt để sinh nhiệt cho đống ủ. Xung quanh đống ủ có quây nilon để giữ nhiệt, tránh mưa.
2.6.1.2. Bổ sung dinh dưỡng cho mùn cưa tạp trước khi đóng bịch
Nguyên liệu mùn cưa sau khi xử lý đạt được pH và độ ẩm thích hợp thì tiến hành bổ sung thêm các chất phụ gia khác nhằm cung cấp thêm một phần dinh dưỡng cho cơ chất trồng nấm theo tỷ lệ được ghi ở bảng 2.6:
Lưu Thị Minh Huệ 34 K34A Sinh_KTNN
Bảng 2.6. Tỷ lệ cơ chất và phụ gia trong hai công thức
Nguyên liệu CT1 CT2 Khối lƣợng (kg) Tính theo % Khối lƣợng (kg) Tính theo % Mùn cưa 280 92.4 280 83,5 Bột nhẹ CaCO3 3,5 1 3,5 1 Cám gạo 7,5 2,5 23.4 7 Cám ngô 9 3 33,5 10 MgSO4 0,3 0,1 0,34 0,1 Đường kính trắng - - 1,7 0,5 2.6.1.3. Đóng túi
- Sử dụng túi nilon 2lớp có kích thước 25 x 35 cm. - Tiến hành đóng bịch:
+ Túi đóng bịch phải được điều chỉnh đáy để khi cho nguyên liệu vào bịch cơ chất không bị xiên vẹo. Tiếp đó là công đoạn làm cổ cứng, đậy nút bông không thấm nước và nút nhựa hoặc giấy bên ngoài trước khi khử trùng.
+ Yêu cầu của bịch nguyên liệu: chiều cao đạt khoảng 16 cm, trọng lượng trung bình bịch có cơ chất mùn cưa tạp là 1,3 kg.
Hình 2.4. Bịch nấm sau khi đóng túi
2.6.1.4. Thanh trùng
Có hai phương pháp thanh trùng như sau:
+ Phương pháp 1: hấp cách thủy ở nhiệt độ 1000C, thời gian kéo dài 14 – 20 giờ.
Lưu Thị Minh Huệ 35 K34A Sinh_KTNN + Phương pháp 2: thanh trùng bằng nồi áp suất (Autoclave) ở nhiệt độ 119 – 1260C (áp suất đạt 1,2 – 1,5 at) trong thời gian 90 – 120 phút.
Hình 2.4. Nồi hấp thanh trùnghình ống Hình 2.5. Nồi hấp thanh trùng hình trụ 2.6.1.5. Cấy giống
2.6.1.5.1. Chuẩn bị
- Bịch hấp xong để nguội 12 – 13h trong phòng cấy giống, nhiệt độc trong bịch phải nhỏ hơn 280
C.
- Phòng cấy: phòng cấy giống phải sạch (được thanh trùng định kỳ bằng bột lưu huỳnh hoặc foocmalin 0,5%).
- Dụng cụ cấy giống: que cấy, panh kẹp, đèn cồn, bàn cấy, cồn sát trùng…
- Nguyên liệu: đã được thanh trùng, để nguội.
- Giống: sử dụng hai loại giống chủ yếu là trên hạt và trên que gỗ.
2.6.1.5.2. Cấy giống
Giống được sử dụng là giống cấp II sau khi hệ sợi lan kín đáy túi (chai) được khoảng 2 ngày (khoảng 20 ngày sau khi cấy giống cấp I trên môi trường agar lên môi trường nhân giống) không sử dụng giống bị mốc,quá già hoặc quá non.
Lưu Thị Minh Huệ 36 K34A Sinh_KTNN Phương pháp 1: cấy giống trên que gỗ, que sắn.
+ Với phương pháp này cần tạo lỗ ở túi nguyên liệu có đường kính 1,8 – 2cm và sâu 15 - 17cm.
+ Khi cấy giống đặt túi nguyên liệu gần đèn cồn và túi giống, sau đó dùng panh kẹp gắp từng que ở túi giống cấy vào túi nguyên liệu, tránh làm gẫy que giống.
- Chú ý
+ Trước khi cấy giống dùng cồn lau miệng chai giống, bóc tách lớp màng trên bề mặt để que giống không bị gãy, nát.
+ Trong quá trình cấy, túi giống luôn để gần đèn cồn (bán kính 20cm). + Sau khi cấy giống đậy lại nút bông, dùng báo mỏng bọc lại đầu nút bông rồi vận chuyển túi vào khu vực ươm.
+ Thường xuyên vệ sinh sạch sẽ phòng cấy giống. Phương pháp 2:
Sử dụng giống Linh Chi cấy trên hạt. Ta dùng que cấy kều nhẹ giống cho đều trên bề mặt túi nguyên liệu tránh giập nát giống.
Lượng giống: 10 - 15gam giống cho 1 túi nguyên liệu (một túi giống 300gam cấy đủ cho 25 – 30 túi nguyên liệu).
- Chú ý :
+ Giống cấy đảm bảo đúng độ tuổi.
+ Trước khi cấy giống dùng cồn lau miệng chai giống, bóc tách lớp màng trên bề mặt để hạt giống không bị nát.
- Trong quá trình cấy, chai giống luôn để nằm ngang.
- Sau khi cấy giống đậy lại nút bông, dùng báo mỏng bọc lại đầu nút bong rồi vận chuyển túi vào khu vực ươm.
- Thường xuyên vệ sinh sạch sẽ phòng cấy giống.
Lưu Thị Minh Huệ 37 K34A Sinh_KTNN Chuyển nhẹ nhàng bịch nấm vào nhà
ươm và đặt trên các giàn giá hoặc xếp thành luống. Khoảng cách giữa các bịch là 2 – 3 cm. Giữa các giàn luống có lối đi để kiểm tra.
Trong thời gian ươm không được tưới nước, hạn chế tối đa việc vận chuyển.
Trong quá trình sợi nấm phát triển nếu thấy có túi bị nhiễm cần phải loại bỏ ngay khỏi khu vực ươm, đồng thời tìm nguyên nhân để có cách khắc phục.
+ Bịch nấm bị nhiễm bề mặt phần lớn do thao tác cấy và phòng giống ô nhiễm.
+ Bịch nấm bị nhiễm từng phần hoặc toàn bộ có thể do bị thủng hoặc hấp vô trùng chưa đạt yêu cầu.
2.6.1.7. Chăm sóc
Trong quá trình chăm sóc, thu hái Linh chi có hai phương pháp sau:
2.6.1.7.1. Phương pháp không phủ đất
- Kể từ ngày cấy giống đến khi rạch bịch (khoảng 25 – 30 ngày) sợi nấm đã ăn kín 3
4 túi. Tiến hành rạch hai vết rạch sâu vào trong bịch 0,2 – 0,5 cm; đối xứng trên bề mặt túi nấm. Đặt bịch nấm trên giàn cách nhau 2 - 3 cm để nấm ra không chạm vào nhau.
- Từ 7 – 10 ngày đầu chủ yếu tưới nước trên nền nhà, đảm bảo độ ẩm 80 – 90% , thông thoáng vừa phải.
- Khi quả thể nấm bắt đầu mọc từ các vết rạch hoặc qua nút bông thì ngoài việc tạo ẩm không khí có thể tưới phun sương nhẹ vào túi nấm mỗi
Lưu Thị Minh Huệ 38 K34A Sinh_KTNN ngày từ 1 – 3 lần (tùy thuộc vào điều kiện thời tiết). Chế độ chăm sóc như trên được duy trì liên tục cho đến khi viền trắng trên vành mũ quả thể không còn nữa là hái được.
2.6.1.7.2. Phương pháp phủ đất
a) Cách phủ đất: Khi sợi nấm đã ăn kín khoảng 3
4 bịch, gỡ bỏ nút bông, mở miệng bịch, phủ lên trên bề mặt một lớp đất có chiều dày 2 – 3 cm.
b) Chăm sóc sau khi phủ đất
Nếu đất khô cần phải tưới rất cẩn thận (tưới phun sương) để đất ẩm trở lại. Tuyệt đối không tưới nhiều, nước thấm xuống nền cơ chất sẽ gây nhiễm bệnh, ảnh hưởng đến quá trình hình thành quả thể nấm. Trong thời gian 7 – 10 ngày đầu (kể từ lúc phủ đất) cần duy trì độ ẩm không khí trong nhà đạt 80 – 90% bằng cách tưới nước thường xuyên trên nền nhà. Khi quả thể bắt đầu hình thành và nhô lên trên mặt lớp đất phủ cấn duy trì độ ẩm liên tục như trên cho đến thời điểm thu hái được. Thời gian từ khi nấm lên đến lúc thu hoạch kéo dài khoảng 65 – 75 ngày.
Khi đó ngoài việc duy trì độ ẩm trong phòng thì ta còn phải tưới phun sương nhẹ trực tiếp trên bề mặt đất phủ 1 – 3 lần trong ngày (tùy theo điều kiện thời tiết) mục đích để giúp đất phủ luôn duy trì độ ẩm (tương tự độ ẩm của đất trồng rau). Việc chăm sóc như trên kéo dài liên tục cho tới khi viền màu trắng trên mũ nấm không còn nữa, lúc đó nấm đến tuổi thu hái.
2.6.1.8. Chăm sóc thu hái 2.6.1.8.1. Chăm sóc 2.6.1.8.1. Chăm sóc 2.6.1.8.1. Chăm sóc
- Xếp các bịch nấm lên các giàn giá trong nhà chăm sóc.
- Trong vòng 7 – 10 ngày đầu chủ yếu tưới nước xuống nền nhà để tạo ẩm. Sau đó tưới phun sương nhẹ vào bịch nấm khoảng 3 – 5 lần mỗi ngày (tùy theo điều kiện thời tiết), sao cho mũ nấm luôn ẩm. Chế độ chăm sóc thu
Lưu Thị Minh Huệ 39 K34A Sinh_KTNN hái như trên được duy trì liên tục cho đến khi viền trắng trên vành mũ quả thể không còn nữa và có màu đồng nhất với màu của cuống nấm là thu hái được.
2.6.1.8.2. Thu hái
- Trước khi thu hái phải ngừng tưới nước từ 36 – 48 giờ. Dùng dao hoặc kéo sắc cắt chân nấm sát bề mặt bịch. Dùng vôi với nồng độ 5% quét lên bề mặt vết cắt để khử trùng.
- Quả thể nấm sau khi thu hái được vệ sinh sạch sẽ, phơi khô hoặc sấy ở nhiệt độ 40 – 500
C.
- Độ ẩm của nấm khô dưới 13%, tỷ lệ khoảng 3 kg tươi được 1 kg khô. - Khi thu hái hết đợt 1, tiến hành chăm sóc như lúc ban đầu để tận thu đợt 2.
- Năng suất thu hoạch đạt 6 – 9% tươi, tương đương 1,8 – 3% khô (1 tấn nguyên liệu thu được 18 – 30 kg nấm Linh chi). Khi kết thúc đợt nuôi trồng cần phải vệ sinh và thanh trùng nhà xưởng bằng foocmon với nồng độ 0,5%.
Lưu Thị Minh Huệ 40 K34A Sinh_KTNN Phân lập Cấy giống cấy giống
2.6.2. Nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ đến sinh trưởng và phát triển hệ sợi của 4 chủng Linh chi
2.6.2.1. Nghiên cứu ảnh hưởng của nhi ệt độ đến thời gian bung sợi
Quan sát và theo dõi sự phát triển hệ sợi theo chỉ tiêu sau: + Thời gian bung sợi ở 3 đợt.
2.6.2.2. Nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ đến thời gian hệ sợi lan phủ
Quan sát và theo dõi sự phát triển hệ sợi theo chỉ tiêu sau: Nguyên liệu khô
Xử lý nguyên liệu
Nguyên liệu sau khi xử lý và các chất phụ gia
Đóng bịch 25 x 30 cm
Hấp khử trùng ở nhiệt độ
95 – 1000C trong 14 - 20 h Bịch nuôi trồng để nguội Ươm sợi Giống sản xuất Giống gốc (bảo quản lạnh) Mẫu nấm tươi Thu thập mẫu
Lưu Thị Minh Huệ 41 K34A Sinh_KTNN + Tốc độ mọc hệ sợi khi hệ sợi lan phủ 100% bịch ở 3 đợt của từng chủng Linh chi trên 2 công thức dinh duỡng
2.6.3. Nghiên cứu sự sinh trưởng và phát triển của hệ sợi ở 4 chủng Linh chi trên 2 công thức dinh dưỡng
Dựa vào kết quả thu được ở thí nghiệm 2.6.2.2, so sánh các chỉ tiêu : + Tốc độ mọc của hệ sợi khi hệ sợi lan phủ 100% bịch ở từng chủng Linh chi.
+ Tốc độ mọc của hệ sợi khi hệ sợi lan phủ 100% bịch trên 2 công thức dinh dưỡng .
+ Đặc điểm hệ sợi.
2.6.4. Nghiên cứu ảnh hưởng của độ ẩm nguyên liệu tới sự sinh trưởng và phát triển hệ sợi của 4 chủng Linh chi
Chỉ tiêu theo dõi:
+ Tốc độ sinh trưởng trung bình của hệ sợi một ngày.
+ Để xác định nhiệt độ đống ủ, dùng phương pháp sấy: lần lượt cân ba mẫu mùn cưa đem đặt vào tủ sấy ở nhiệt độ 105oC tới khi khối lượng mỗi mẫu mùn cưa không thay đổi đem đi cân. Độ ẩm đống ủ được xác định bằng công thức: W (%) = a b 100% a Trong đó: W (%): Độ ẩm đống ủ
a (g) : Khối lượng của mùn cưa trước khi sấy khô b (g) : Khối lượng của mùn cưa sau khi sấy khô
+ Để đo tốc độ mọc của hệ sợi, dùng phương pháp đo độ dài hệ sợi nấm. Sử dụng thước đo độ dài có đơn vị cm. Khi hệ sợi bắt đầu lan phủ, chọn một vùng nhất định trên bịch để theo dõi, dùng bút đánh dấu phía ngoài
Lưu Thị Minh Huệ 42 K34A Sinh_KTNN bịch ở vị trí tương ứng của hệ sợi. Hàng ngày đo một lần. Sau mỗi lần đo độ lan của hệ sợi, dùng bút đánh dấu để làm mốc cho lần kiểm tra tiếp theo. Lấy kết quả trung bình của các lần đo đó để xác định tốc độ mọc sợi trung bình một ngày của 4 chủng Linh chi trên 2 công thức dinh dưỡng .
2.6.5. Theo dõi khả năng nhiễm mốc trong quá trình nuôi sợi
Trong quá trình chăm sóc, tiến hành theo dõi ảnh hưởng của nhiệt độ , độ ẩm nguyên liệu đến khả năng nhiễm mốc của bịch Linh chi theo chỉ tiêu:
+ Tỷ lệ nhiễm mốc.
Số bịch nấm bị nhiễm mốc
Tỷ lệ bịch nấm nhiễm mốc = × 100%
Tổng số bịch nấm
2.6.6. Nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ , độ ẩm môi trường tới sự sinh trưởng và phát triển quả thể nấm Linh chi trên hai công thức dinh dưỡng khác nhau
Quan sát và theo dõi sự phát triển của quả thể nấm Linh chi theo chỉ tiêu sau:
+ Tốc độ phát triển quả thể ở 3 đợt của từng chủng Linh chi trên 2 công thức nuôi trồng .
2.6.7. Nghiên cứu sự sinh trưởng và phát triển của quả thể ở 4 chủng Linh chi trên 2 công thức dinh dưỡng
Dựa vào kết quả ở thí nghiệm 2.6.6, so sánh các chỉ tiêu sau : + Tốc độ phát triển quả thể của các chủng nấm khác nhau. + Tốc độ phát triển quả thể ở 2 CT dinh dưỡng khác nhau. + Đặc điểm quả thể.