Tình hình nghiên cứu trong nước

3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài

1.2.2 Tình hình nghiên cứu trong nước

Nước ta với khí hậu nhiệt đới gió mùa, nguồn nguyên liệu sẵn có như mùn cưa, rơm, rạ..., lực lượng lao động đông, trong khi đó trồng nấm thì không cần đất mà chỉ cần diện tích nhỏ, vốn đầu tư thấp, vòng quay ngắn…. là những điều kiện thuận lợi để nghề nuôi trồng nấm phát triển. Từ nhiều năm trở lại đây nhiều mô hình trồng nấm đã được đưa ra và đang đem lại hiệu quả kinh tế, giúp người dân xoá đói giảm nghèo và từng bước nâng cao chất lượng cuộc sống.

Lưu Thị Minh Huệ 29 K34A Sinh_KTNN Từ những năm 70, đặc biệt những năm 80, 90 của thế kỷ XX tại Việt Nam nấm Linh chi đã được quan tâm nhiều về thành phần hóa học cũng như thành phần dược lý và quy trình sản xuất ra các chế phẩm.

Vào năm 1978 loài chuẩn Ganoderma lucidum được nuôi trồng thành

công trong phòng thí nghiệm. Từ năm 1990, phong trào nuôi trồng Linh chi bùng nổ ở thành phố Hồ Chí Minh, sản lượng hàng năm đạt khoảng 10 tấn .[19].

Năm 1994, Phạm Quang Thu đã đưa một chủng Linh chi đỏ - đặc sản của vùng rừng lim Bắc Bộ vào nuôi trồng chủ động . [17].

Từ năm 1997 đến nay, Trung tâm Công nghệ sinh học thực vật – viện Di truyền Nông nghiệp đã nghiên cứu và nuôi trồng thành công nhiều chủng Linh chi khác nhau mở rộng phong trào nuôi trồng Linh chi ở Hà Nội và các tỉnh phía bắc.

Ngành trồng nấm Linh chi những năm gần đây phát triển mạnh mẽ, tổng sản lượng ước tính khoảng 100 tấn/năm. Với công nghệ ngày càng hiện đại, nhiều nhà khoa học nước ta đã nghiên cứu thành công các nguồn nguyên liệu nuôi trồng nấm Linh chi thay cho mùn cưa cao su trước đây. Kết quả này góp phần tránh lãng phí và hạn chế sự ô nhiễm môi trường bởi nguyên liệu được sử dụng là phế thải các nhà máy đường, công nghiệp dệt như: bã mía, bông thải…

Nhờ đầu tư phát triển nghề trồng nấm, đến nay hàng vạn hộ nông dân trong cả nước đang có thu nhập khá cao và ổn định từ cây nấm. Nhiều hộ từ nghèo đói nhờ tận dụng lao động, nguyên liệu rơm rạ, dám nghĩ, dám làm giúp nông dân vươn lên làm giàu.

Trong một vài năm gần đây con người đã tìm kiếm và phát hiện một lượng khá lớn nấm cổ Linh chi tại một số vùng núi cao nước ta. Đây là một

Lưu Thị Minh Huệ 30 K34A Sinh_KTNN kho tàng sản phẩm quý của y dược Việt Nam, cần được nghiên cứu sâu để đưa vào sản xuất, khai thác và phát triển nấm Linh chi ở nước ta.[2].

Lưu Thị Minh Huệ 31 K34A Sinh_KTNN

CHƢƠNG 2

ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1. Đối tƣợng nghiên cứu

Bốn chủng Linh chi (Ganoderma lucidum) sử dụng trong nghiên cứu, được cung cấp từ quỹ gen của Trung tâm Công nghệ sinh học thực vật thuộc Viện Di truyền Nông nghiệp, ký hiệu: HA1, HA2, HA3, HA4.

Giống được sử dụng trong thí nghiệm là giống cấp II.

2.2. Phạm vi nghiên cứu

- Đề tài được thực hiện tại Trung tâm Công nghệ sinh học thực vật và bộ môn Di truyền và Chọn giống cây trồng cạn – Nấm ăn – Viện Di truyền Nông nghiệp – Từ Liêm – Hà Nội.

- Phòng thí nghiệm Di truyền – Khoa Sinh - KTNN – Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2.

- Khu sản xuất nông nghiệp - xã Cao Minh - Xuân Hòa - Phúc Yên - Vĩnh Phúc.

2. 3. Bố trí thí nghiệm

Thí nghiệm được thực hiện làm 3 đợt: + Đợt 1: cấy giống từ ngày 15/ 02/ 2011. + Đợt 2: cấy giống từ ngày15/ 06/ 2011 + Đợt 3: cấy giống từ ngày 15/ 09/ 2011.

2.4. Nội dung nghiên cƣ́u

- Tạo một số môi trường dinh dưỡng khác nhau từ giá thể mùn cưa tạp.

- Nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ môi trường đến sự sinh trưởng và phát triển của bốn chủng Linh chi

+ Nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ đến thời gian hệ sợi lan phủ . + Nghiên cứu sự sinh trưởng , phát triển hệ sợi của bốn chủng Linh chi trên hai công thức dinh dưỡng khác nhau.

Lưu Thị Minh Huệ 32 K34A Sinh_KTNN

- Nghiên cứu ảnh hưởng của độ ẩm nguyên liệu đến sự sinh trưởng của hệ sợi.

- Theo dõi tỷ lệ nhiễm mốc.

- Nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ, độ ẩm môi trường đến sự sinh trưởng và phát triển quả thể của bốn chủng Linh chi trên hai công thức dinh dưỡng khác nhau.

- Nghiên cứu sự hình thành và phát triển quả thể của bốn chủng Linh chi trên hai công thức dinh dưỡng khác nhau.

- Nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ , độ ẩm môi trường đến năng suất của bốn chủng nấm Linh chi.

- Nghiên cứu ảnh hưởng của hai công thức dinh dưỡng khác nhau đến năng suất của bốn chủng Linh chi.

2.5. Chuẩn bị điều kiện nuôi trồng

2.5.1. Nguyên liệu

Mùn cưa tạp. Yêu cầu mùn cưu phải khô (độ ẩm nhỏ hơn 20%) không bị mốc, không có tinh dầu, không qua xử lý hóa chất làm trắng hoặc sạch.

Phụ gia: có bột nhẹ CaCO3, cám gạo, bột ngô nghiền, nước vôi, đường trắng, MgSO4.

2.5.2. Nhà nuôi trồng nấm

Nhà nuôi trồng nấm bao gồm hai phòng chính: phòng ươm sợi và phòng chăm sóc thu hái quả thể.

Phòng ươm sợi phải đảm bảo những yêu cầu sau: sạch sẽ, nhiệt độ 20 – 30oC, độ ẩm từ 75% - 85%, thoáng, ánh sáng yếu, có hệ thống giàn giá để đặt bịch, giữa các giàn giá phải có lối đi để kiểm tra, theo dõi bịch.

Phòng chăm sóc thu hái yêu cầu: sạch sẽ, thoáng mát, ánh sáng khuyếch tán (ở mức đọc sách) chiếu đều khắp phòng, kín gió, nhiệt độ thích

Lưu Thị Minh Huệ 33 K34A Sinh_KTNN hợp 220

C-300C, độ ẩm đạt 80 – 90%. Trong nhà có hệ thống giàn giá để tăng diện tích sử dụng.

Trước và sau mỗi đợt nuôi trồng cần vệ sinh thật tốt trong và xung quanh khu vực nuôi trồng nấm. Nếu có điều kiện có thể tiến hành đốt bột lưu huỳnh xông nhà trồng nấm hay phun foocmol với nồng độ khoảng 0,5% trước khi đưa nguyên liệu vào trồng nấm một tuần.

2.5.3. Các thiết bị và vật tư khác

Chuẩn bị túi nilon PE hoặc PP có kích thước 25 × 35 cm, cỡ nút và cổ nút chịu nhiệt, bông, chun buộc miệng túi.

Lò hấp thủ công dạng mái vòm.

Dụng cụ cấy giống gồm: que cấy bằng kim loại,panh kẹp kim loại, đèn cồn, cồn, diêm, khay đựng kim loại, giấy báo,chun buộc, bốc (box) phải đảm bảo sạch sẽ, thoáng khí và được khử trùng thường xuyên.

2.6. Phƣơng pháp nghiên cƣ́u

2.6.1. Phương pháp nuôi trồng Linh chi

2.6.1.1. Xử lý nguyên liệu

Mùn cưa của tạp không bị mốc, được tạo ẩm bằng nước vôi trong có độ pH = 12 – 13. Tưới phun tạo ẩm cho nguyên liệu, độ ẩm tốt nhất đạt 60 - 65%.

Sau đó ủ mùn cưa thành đống, ủ khoảng 30 – 40 ngày thì đảo nguyên liệu. Yêu cầu của đống ủ là phải nén đống ủ càng chặt càng tốt để sinh nhiệt cho đống ủ. Xung quanh đống ủ có quây nilon để giữ nhiệt, tránh mưa.

2.6.1.2. Bổ sung dinh dưỡng cho mùn cưa tạp trước khi đóng bịch

Nguyên liệu mùn cưa sau khi xử lý đạt được pH và độ ẩm thích hợp thì tiến hành bổ sung thêm các chất phụ gia khác nhằm cung cấp thêm một phần dinh dưỡng cho cơ chất trồng nấm theo tỷ lệ được ghi ở bảng 2.6:

Lưu Thị Minh Huệ 34 K34A Sinh_KTNN

Bảng 2.6. Tỷ lệ cơ chất và phụ gia trong hai công thức

Nguyên liệu CT1 CT2 Khối lƣợng (kg) Tính theo % Khối lƣợng (kg) Tính theo % Mùn cưa 280 92.4 280 83,5 Bột nhẹ CaCO3 3,5 1 3,5 1 Cám gạo 7,5 2,5 23.4 7 Cám ngô 9 3 33,5 10 MgSO4 0,3 0,1 0,34 0,1 Đường kính trắng - - 1,7 0,5 2.6.1.3. Đóng túi

- Sử dụng túi nilon 2lớp có kích thước 25 x 35 cm. - Tiến hành đóng bịch:

+ Túi đóng bịch phải được điều chỉnh đáy để khi cho nguyên liệu vào bịch cơ chất không bị xiên vẹo. Tiếp đó là công đoạn làm cổ cứng, đậy nút bông không thấm nước và nút nhựa hoặc giấy bên ngoài trước khi khử trùng.

+ Yêu cầu của bịch nguyên liệu: chiều cao đạt khoảng 16 cm, trọng lượng trung bình bịch có cơ chất mùn cưa tạp là 1,3 kg.

Hình 2.4. Bịch nấm sau khi đóng túi

2.6.1.4. Thanh trùng

Có hai phương pháp thanh trùng như sau:

+ Phương pháp 1: hấp cách thủy ở nhiệt độ 1000C, thời gian kéo dài 14 – 20 giờ.

Lưu Thị Minh Huệ 35 K34A Sinh_KTNN + Phương pháp 2: thanh trùng bằng nồi áp suất (Autoclave) ở nhiệt độ 119 – 1260C (áp suất đạt 1,2 – 1,5 at) trong thời gian 90 – 120 phút.

Hình 2.4. Nồi hấp thanh trùnghình ống Hình 2.5. Nồi hấp thanh trùng hình trụ 2.6.1.5. Cấy giống

2.6.1.5.1. Chuẩn bị

- Bịch hấp xong để nguội 12 – 13h trong phòng cấy giống, nhiệt độc trong bịch phải nhỏ hơn 280

C.

- Phòng cấy: phòng cấy giống phải sạch (được thanh trùng định kỳ bằng bột lưu huỳnh hoặc foocmalin 0,5%).

- Dụng cụ cấy giống: que cấy, panh kẹp, đèn cồn, bàn cấy, cồn sát trùng…

- Nguyên liệu: đã được thanh trùng, để nguội.

- Giống: sử dụng hai loại giống chủ yếu là trên hạt và trên que gỗ.

2.6.1.5.2. Cấy giống

Giống được sử dụng là giống cấp II sau khi hệ sợi lan kín đáy túi (chai) được khoảng 2 ngày (khoảng 20 ngày sau khi cấy giống cấp I trên môi trường agar lên môi trường nhân giống) không sử dụng giống bị mốc,quá già hoặc quá non.

Lưu Thị Minh Huệ 36 K34A Sinh_KTNN  Phương pháp 1: cấy giống trên que gỗ, que sắn.

+ Với phương pháp này cần tạo lỗ ở túi nguyên liệu có đường kính 1,8 – 2cm và sâu 15 - 17cm.

+ Khi cấy giống đặt túi nguyên liệu gần đèn cồn và túi giống, sau đó dùng panh kẹp gắp từng que ở túi giống cấy vào túi nguyên liệu, tránh làm gẫy que giống.

- Chú ý

+ Trước khi cấy giống dùng cồn lau miệng chai giống, bóc tách lớp màng trên bề mặt để que giống không bị gãy, nát.

+ Trong quá trình cấy, túi giống luôn để gần đèn cồn (bán kính 20cm). + Sau khi cấy giống đậy lại nút bông, dùng báo mỏng bọc lại đầu nút bông rồi vận chuyển túi vào khu vực ươm.

+ Thường xuyên vệ sinh sạch sẽ phòng cấy giống.  Phương pháp 2:

Sử dụng giống Linh Chi cấy trên hạt. Ta dùng que cấy kều nhẹ giống cho đều trên bề mặt túi nguyên liệu tránh giập nát giống.

Lượng giống: 10 - 15gam giống cho 1 túi nguyên liệu (một túi giống 300gam cấy đủ cho 25 – 30 túi nguyên liệu).

- Chú ý :

+ Giống cấy đảm bảo đúng độ tuổi.

+ Trước khi cấy giống dùng cồn lau miệng chai giống, bóc tách lớp màng trên bề mặt để hạt giống không bị nát.

- Trong quá trình cấy, chai giống luôn để nằm ngang.

- Sau khi cấy giống đậy lại nút bông, dùng báo mỏng bọc lại đầu nút bong rồi vận chuyển túi vào khu vực ươm.

- Thường xuyên vệ sinh sạch sẽ phòng cấy giống.

Lưu Thị Minh Huệ 37 K34A Sinh_KTNN Chuyển nhẹ nhàng bịch nấm vào nhà

ươm và đặt trên các giàn giá hoặc xếp thành luống. Khoảng cách giữa các bịch là 2 – 3 cm. Giữa các giàn luống có lối đi để kiểm tra.

Trong thời gian ươm không được tưới nước, hạn chế tối đa việc vận chuyển.

Trong quá trình sợi nấm phát triển nếu thấy có túi bị nhiễm cần phải loại bỏ ngay khỏi khu vực ươm, đồng thời tìm nguyên nhân để có cách khắc phục.

+ Bịch nấm bị nhiễm bề mặt phần lớn do thao tác cấy và phòng giống ô nhiễm.

+ Bịch nấm bị nhiễm từng phần hoặc toàn bộ có thể do bị thủng hoặc hấp vô trùng chưa đạt yêu cầu.

2.6.1.7. Chăm sóc

Trong quá trình chăm sóc, thu hái Linh chi có hai phương pháp sau:

2.6.1.7.1. Phương pháp không phủ đất

- Kể từ ngày cấy giống đến khi rạch bịch (khoảng 25 – 30 ngày) sợi nấm đã ăn kín 3

4 túi. Tiến hành rạch hai vết rạch sâu vào trong bịch 0,2 – 0,5 cm; đối xứng trên bề mặt túi nấm. Đặt bịch nấm trên giàn cách nhau 2 - 3 cm để nấm ra không chạm vào nhau.

- Từ 7 – 10 ngày đầu chủ yếu tưới nước trên nền nhà, đảm bảo độ ẩm 80 – 90% , thông thoáng vừa phải.

- Khi quả thể nấm bắt đầu mọc từ các vết rạch hoặc qua nút bông thì ngoài việc tạo ẩm không khí có thể tưới phun sương nhẹ vào túi nấm mỗi

Lưu Thị Minh Huệ 38 K34A Sinh_KTNN ngày từ 1 – 3 lần (tùy thuộc vào điều kiện thời tiết). Chế độ chăm sóc như trên được duy trì liên tục cho đến khi viền trắng trên vành mũ quả thể không còn nữa là hái được.

2.6.1.7.2. Phương pháp phủ đất

a) Cách phủ đất: Khi sợi nấm đã ăn kín khoảng 3

4 bịch, gỡ bỏ nút bông, mở miệng bịch, phủ lên trên bề mặt một lớp đất có chiều dày 2 – 3 cm.

b) Chăm sóc sau khi phủ đất

Nếu đất khô cần phải tưới rất cẩn thận (tưới phun sương) để đất ẩm trở lại. Tuyệt đối không tưới nhiều, nước thấm xuống nền cơ chất sẽ gây nhiễm bệnh, ảnh hưởng đến quá trình hình thành quả thể nấm. Trong thời gian 7 – 10 ngày đầu (kể từ lúc phủ đất) cần duy trì độ ẩm không khí trong nhà đạt 80 – 90% bằng cách tưới nước thường xuyên trên nền nhà. Khi quả thể bắt đầu hình thành và nhô lên trên mặt lớp đất phủ cấn duy trì độ ẩm liên tục như trên cho đến thời điểm thu hái được. Thời gian từ khi nấm lên đến lúc thu hoạch kéo dài khoảng 65 – 75 ngày.

Khi đó ngoài việc duy trì độ ẩm trong phòng thì ta còn phải tưới phun sương nhẹ trực tiếp trên bề mặt đất phủ 1 – 3 lần trong ngày (tùy theo điều kiện thời tiết) mục đích để giúp đất phủ luôn duy trì độ ẩm (tương tự độ ẩm của đất trồng rau). Việc chăm sóc như trên kéo dài liên tục cho tới khi viền màu trắng trên mũ nấm không còn nữa, lúc đó nấm đến tuổi thu hái.

2.6.1.8. Chăm sóc thu hái 2.6.1.8.1. Chăm sóc 2.6.1.8.1. Chăm sóc 2.6.1.8.1. Chăm sóc

- Xếp các bịch nấm lên các giàn giá trong nhà chăm sóc.

- Trong vòng 7 – 10 ngày đầu chủ yếu tưới nước xuống nền nhà để tạo ẩm. Sau đó tưới phun sương nhẹ vào bịch nấm khoảng 3 – 5 lần mỗi ngày (tùy theo điều kiện thời tiết), sao cho mũ nấm luôn ẩm. Chế độ chăm sóc thu

Lưu Thị Minh Huệ 39 K34A Sinh_KTNN hái như trên được duy trì liên tục cho đến khi viền trắng trên vành mũ quả thể không còn nữa và có màu đồng nhất với màu của cuống nấm là thu hái được.

2.6.1.8.2. Thu hái

- Trước khi thu hái phải ngừng tưới nước từ 36 – 48 giờ. Dùng dao hoặc kéo sắc cắt chân nấm sát bề mặt bịch. Dùng vôi với nồng độ 5% quét lên bề mặt vết cắt để khử trùng.

- Quả thể nấm sau khi thu hái được vệ sinh sạch sẽ, phơi khô hoặc sấy ở nhiệt độ 40 – 500

C.

- Độ ẩm của nấm khô dưới 13%, tỷ lệ khoảng 3 kg tươi được 1 kg khô. - Khi thu hái hết đợt 1, tiến hành chăm sóc như lúc ban đầu để tận thu đợt 2.

- Năng suất thu hoạch đạt 6 – 9% tươi, tương đương 1,8 – 3% khô (1 tấn nguyên liệu thu được 18 – 30 kg nấm Linh chi). Khi kết thúc đợt nuôi trồng cần phải vệ sinh và thanh trùng nhà xưởng bằng foocmon với nồng độ 0,5%.

Lưu Thị Minh Huệ 40 K34A Sinh_KTNN Phân lập Cấy giống cấy giống

2.6.2. Nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ đến sinh trưởng và phát triển hệ sợi của 4 chủng Linh chi

2.6.2.1. Nghiên cứu ảnh hưởng của nhi ệt độ đến thời gian bung sợi

Quan sát và theo dõi sự phát triển hệ sợi theo chỉ tiêu sau: + Thời gian bung sợi ở 3 đợt.