2.3.1.1 Phương pháp xác định carbon tổng số của cơ chất
Xác định carbon tổng số bằng phương pháp so màu Ghram
- Nguyên tắc: dựa trên cơ sở oxid hóa chất hữu cơ bằng K2Cr2O7 theo phương pháp Walkley- Black, xác định hàm lượng chất hữu cơ bằng phương pháp so màu xanh của Cr3+ tạo thành do quá trình khử K2Cr2O7 khi đo ở bước sóng 625 nm.
- Thiết bị: quang phổ kế.
- Hóa chất thí nghiệm: gồm dung dịch K2Cr2O7 , acid H2SO4 đậm đặc. - Cách pha các dung dịch thí nghiệm:
Dung dịch K2Cr2O7 : cân chính xác 49,04g K2Cr2O7 tinh thể pha thành 1l dung dịch .
Dung dịch tiêu chuẩn chất hữu cơ 3% (dung dịch mẹ): cân chính xác 7,125g saccarose (đường mía C12H22O11) pha trong 100ml nước cất. Dung dịch tiêu chuẩn sử dụng (dung dịch con): trên cơ sở xác định dãy
tiêu chuẩn từ 0- 1,0 ml (chứa từ 0- 30mg C, tương đương từ 0-3,0% C khi mẫu là 1g).
- Tiến hành:
Cân chính xác 0,1 g mẫu đã nghiền qua rây 0,2 mm cho vào binh tam giác 125ml.
Page 25 Cho nhanh 20ml acid H2SO4 đậm đặc.
Thêm chính xác 60 ml nước cất và trộn đều.
Để qua đêm cho lắng cặn, hoặc có thể ly tâm để tách cặn. Trích một phần dung dịch trên đem đo ở bước sóng 625nm.
Tiến hành với dãy chuẩn bằng cách dùng micropipette hút lượng dung dịch mẹ từ 0- 1,0ml cho vào bình tam giác 125ml.
Làm đồng thời cùng hai mẫu trắng. - Cách tính :
Xác định đồ thị tiêu chuẩn và trên cơ sở đo trên máy xác định hàm lượng C trong mẫu.
2.3.1.2 Phươngpháp xác định hàm lượng nitơ tổng
- Nguyên tắc: theo phương pháp Kjeldahl, chất đạm sau khi vô cơ hóa tạo thành dạng ((NH4)2SO4), cho tác dụng với chất kiềm mạnh như NaOH phóng thích ra amo- niac. Lượng amoniac phóng thích ra, được hơi nước lôi cuốn bằng máy Parnas- Wargner và được đưa vào bình tam giác chứa một lương thừa H2SO4. Từ đó ta xác định được lượng amonic phóng thích ra, tương đương xác định được lương đạm có trong mẫu. (NH4)2SO4 + 2 NaOH 2 NH4OH + Na2SO4 2 NH4OH + H2SO4 (NH4)2SO4 + H2O - Dụng cụ Máy Parnas-Wargner. Bình Kjeldahl. Tủ hút độc (tủ Hotte). - Hóa chất Acid H2SO4 đậm đặc. Acid H2SO4 0,1N. NaOH 0,1N. Nước cất hai lần. Metyl đỏ. Xúc tác K2SO4/CuSO4.
Page 26 - Tiến hành
Cân chính xác 1g mẫu nghiền nát cho vào bình Kjeldahl. Thêm vào 5ml acid H2SO4 đậm đặc và khỏang 0,5 g xúc tác K2SO4/CuSO4, sau đó đưa vào trong tủ Hotte tiến hành vô cơ hóa mẫu.
Dung dịch sau khi vô cơ hóa có thể không màu hoặc có màu xanh lơ, pha lõang mẫu trong nước cất để được 100ml dịch lõang.
Cất đạm: hút 10ml dịch mẫu pha lõang trên cho vào máy Parnas- Wargner sau đó thêm 10ml NaOH vào và tiến hành cất đạm. Hứng NH3 bay ra bằng erlen bên trong có chứa acid H2SO4 0,1N và có sự hiện diện của metyl đỏ. - Cách tính:
Số gam nitơ tổng có trong 100g nguyên liệu khô. N= 1,4× ΔV × x (g/100g).
Với ΔV= V0 – V1
V0: thể tích NaOH 0,1N của mẫu thử trắng. V1: thể tích NaOH 0,1N của mẫu thử thật.
x: là hệ số hiệu chỉnh của dung dịch NaOH 0,1N.