KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
3.4.Xác định thời gian tối ưu trồng giá đỗ để thu được enzyme protease có hoạt lực cao nhất
hoạt lực cao nhất
3.4.1. Tiến hành
Tiến hành ngâm hạt đỗ xanh trong 10h, rồi ủ đỗ xanh trong 6 ngày ở nhiệt độ 350C, độ ẩm không khí 85%. Cứ sau mỗi khoảng thời gian cách nhau 12h ta sẽ thu nhận 1 mẫu mầm giá. Lần lượt thực hiện phá vỡ tế bào bằng phương pháp lạnh đông, tan giá 1 lần rồi nghiền với khối lượng bột SiO2 bằng 160% so với khối lượng mẫu mầm giá.
Thời gian nghiền mỗi mẫu là 15 phút, trong quá trình nghiền có làm lạnh để ổn định nhiệt độ quá trình nghiền bằng cách để cối trong thau nhựa chứa đá lạnh đông khi nghiền mẫu. Thêm vào đó đệm phosphate pH=7 để ổn định enzyme (1:3w/v). Lọc để tách cặn bằng vải lọc thô, sau đó đem ly tâm ở 5500 vòng/phút trong 20 phút, đem xác định hoạt tính.
Hình 3.3. Hình thái của mầm giá đỗ theo thời gian nảy mầm.
Hình 3.4. Đồ thị biểu diễn mối quan hệ giữa hoạt tính enzyme theo thời gian trồng.
3.4.3. Nhận xét đồ thị
Qua đồ thị hình 3.4, nhìn chung sau 144h trồng giá đổ thì hoạt tính enzyme giảm, cụ thể từ 5,4÷2,29 (UI/ml).
Hoạt tính enzyme tăng mạnh từ 24h đến 48h, cụ thể tăng từ 5,4÷ 11,37 (UI/ml). Từ sau 48h hoạt tính enzyme giảm đều đến 84h, cụ thể từ 11,37÷6,54 (UI/ml). Sau 84h hoạt tính enzyme giảm nhẹ, cụ thể từ 6,54÷2,29 (UI/ml).
Tại thời gian ủ sau 48h cho hoạt tính enzyme protese cao nhất (11,37 UI/ml), cao gấp 5 lần so với tại thời điểm ủ ở 144h (2,29 UI/ml).
3.4.4. Giải thích kết quả thí nghiệm
− Từ 24÷48h hoạt tính enzyme protease tăng mạnh vì sau khi hạt đỗ được ủ trương nước, lúc này hệ enzyme trong hạt được kích hoạt chuyển từ “trạng thái ngủ” sang trạng thái hoạt động, hàm lượng tăng lên đáng kể để phân giải các hợp chất dự trữ trong hạt như tinh bột, protein tạo ra các chất trung gian sinh tổng hợp và năng lượng cung cấp cho sự phát triển của phôi, sự lớn lên của mầm cây.
− Sau 48h hoạt tính enzyme giảm vì khi đó các hợp chất dự trữ hầu như đã được phân giải và cạn kiệt, cây đã bắt đầu xuất hiện rễ, 2 lá mầm và xảy ra những quá trình như quang hợp để tổng hợp các chất cần thiết cho sự phát triển của cây.
− Kết quả này cũng tương tự với nghiên cứu của Mahbubar [13] và Ghavidel [22], hoạt tính của enzyme tăng mạnh sau ủ đỗ từ ngày 1 đến ngày 2 và giảm ở các ngày tiếp theo.