dòng vi khuẩn phân lập từ đất luân canh lúa - màu
Tất cả 20 mẫu đất đƣợc lấy trên mô hình luân canh lúa - màu gồm có 12 mẫu đất lấy ở vụ màu và 8 mẫu đất lấy ở vụ lúa. Các mẫu đất này đƣợc làm giàu mật số cộng đồng vi khuẩn trong môi trƣờng khoáng tối thiểu với Butachlor ở nồng độ 20 ppm. Sau
19
5 lần đƣợc làm mật số, các cộng đồng vi khuẩn này đƣợc thực hiện thí nghiệm để khảo sát khả năng phân hủy Butachlor ở nồng độ 20 ppm trong môi trƣờng khoáng tối thiểu với 2 nghiệm thức và 4 lần lặp lại. Sau 28 ngày nuôi cấy, hàm lƣợng Butachlor còn lại trong dịch nuôi đƣợc phân tích trên máy HPLC.
Nghiệm thức 1: Môi trƣờng dung dịch MM có chứa Butachlor ở nồng độ 20 ppm và 50 µl dịch nuôi chứa vi khuẩn.
Nghiệm thức 2: Môi trƣờng dung dịch MM và Butachlor ở nồng độ 20 ppm. Khảo sát khả năng phân hủy Butachlor của 20 cộng đồng vi khuẩn, có 3 cộng đồng vi khuẩn phân hủy tốt Butachlor đƣợc chọn để phân lập là BT50L và CL4M (hai cộng đồng vi khuẩn này đƣợc lấy ở vụ màu) và BT50L đƣợc lấy ở vụ lúa. Trong đó BT50L (vụ lúa) và BT50M (vụ màu) đƣợc thu mẫu từ một ruộng luân canh lúa - màu, cộng đồng BT50M phân lập đƣợc 15 dòng và gom thành 3 nhóm, BT50L phân lập đƣợc 20 dòng và gom thành 4 nhóm và CL4M phân lập đƣợc 17 dòng và gom thành 3 nhóm (Danh sách các nhóm đƣợc trình bày ở Phụ chƣơng 5). Trong đó mỗi nhóm với 5 hoặc 6 dòng/nhóm, các dòng trong một nhóm đƣợc lựa chọn một cách ngẫu nhiên và không có dòng nào trùng lại giữa các nhóm của một cộng đồng. Sau đó 10 nhóm này đƣợc thực hiện thí nghiệm để khảo sát khả năng phân hủy Butachlor ở nồng độ 20 ppm trong môi trƣờng khoáng tối thiểu với 2 nghiệm thức và 4 lần lặp lại. Sau 32 ngày nuôi cấy, hàm lƣợng Butachlor còn lại trong dịch nuôi đƣợc phân tích trên máy HPLC.
Nghiệm thức 1: Môi trƣờng MM có chứa Butachlor ở nồng độ 20 ppm và vi khuẩn.
Nghiệm thức 2: Môi trƣờng MM chứa Butachlor ở nồng độ 20 ppm.
Trên đĩa môi trƣờng TSA, các khuẩn lạc đƣợc cấy trực tiếp cho vào môi trƣờng MM bằng cách dùng que chấm nhẹ vào khuẩn lạc đó rồi cho vào dung dịch MM.