và hệ số nhân lan Kim tuyến (A. setaceus)
Tác dụng rõ nét nhất của auxin đối với sự phân hóa tế bào là khả năng phát sinh rễ đã được kiểm chứng từ năm 1934 (Went, Skoog, Thimann). Nhiều nghiên cứu đã cho thấy vai trò của IBA và αNAA tác động đến quá trình phát sinh rễ trên nhiều đối tượng nghiên cứu như cây lát hoa Côn Đảo, tram Úc… (Trần Văn Minh và Cộng sự, 2003; Nguyễn Văn Nghi và Cộng sự, 2003).
Để kiểm tra ảnh hưởng của auxin (IBA và NAA) tới sự phát sinh hình thái và hệ số nhân, thí nghiệm này được tiến hành trên môi trường Knud* và bổ sung riêng rẽ IBA và αNAA với các nồng độ khác nhau 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 3,0mg/l + 20g/l Sucrose + 100ml/l ND + 7g/l agar. Kết quả thu được ở Bảng 3.6.
Bảng 3.6. Ảnh hưởng của auxin (IBA và αNAA) tới sự phát sinh hình thái lan Kim tuyến
Auxin (mg/l) Chiều dài chồi (cm) Số chồi (chồi/mẫu) Số đốt (đốt/chồi) Chiều dài TB rễ (cm) Số rễ
(rễ/chồi) Đặc điểm chồi
0 (ĐC) 3,33 1,33 2,13 0,92 2,04 Xanh nhạt, lá bé
IBA 0,5 3,12 3,28 2,31 1,12 1,43 Xanh nhạt, có lông tơ
1,0 3,22 3,36 2,52 0,88 1,10 Xanh đậm, lá bé 1,5 3,55 4,87 2,66 0,98 0,96 Xanh đậm, lá to 2,0 3,23 2,28 2,39 1,05 0,83 Xanh nhạt, lá bé 3,0 2,12 2,33 2,58 1,17 0,71 Xanh nhạt, lá bé CV% 2,2 4,1 3,7 3,3 3,5 LSD0,05 0,13 0,095 0,16 0,059 0,13 αNAA 0,5 3,23 3,06 2,54 1,57 1,68 Bé, xanh nhạt 1,0 3,41 4,56 2,87 1,33 2,20 Xanh đậm, Lá to 1,5 3,33 3,78 2,30 0,83 1,42 Bé, xanh nhạt 2,0 3,37 3,11 1,97 1,32 1,32 Bé, xanh nhạt 3,0 3,67 2,67 1,79 1,12 1,21 Bé, xanh nhạt CV% 1 2,9 4 2,4 2,1 LSD0,05 0,6 0,14 0,16 0,051 0,13
Đ/C 0.5 1.0 1.5 2.0 3.0 (mg/l)
Ảnh hưởng của IBA
ĐC 0,5 1,0 mg/l
C 0
1,5 2,0 3,0 mg/l
Ảnh hưởng của αNAA
Hình 6. Ảnh hưởng của auxin (IBA và αNAA) tới sự phát sinh hình thái lan Kim tuyến
Sau 8 tuần nuôi cấy trong môi trường có bổ sung auxin IBA và αNAA với các dải nồng độ từ 0,5-3,0 mg/l thu được kết quả trong Bảng 3.6. Kết quả cho thấy, IBA và αNAA có hiệu quả sản sinh rễ bất định, αNAA có hiệu quả sản
sinh rễ lớn hơn IBA nhưng hiệu quả sản sinh rễ không rõ ràng ở cả 2 loại phytohormon trên. Số lượng rễ và chiều dài rễ không khác biệt nhiều giữa các công thức. Trái lại, hai loại auxin này lại có hiệu quả rõ rệt trong việc sản sinh chồi bất định và đạt kết quả lớn và khác biệt hẳn giữa các công thức. Cụ thể là
IBA ở nồng độ (1,5mg/l) cho 4,87 chồi/mẫu và αNAA (1,0mg/l) cho 4,55
chồi/mẫu. Lá cây có màu xanh đậm nhưng kích thước lá nhỏ hơn so với cytokinin. Trong rất nhiều các thí nghiệm và tài liệu nghiên cứu, các loại auxin như IBA, αNAA, 2,4 D, IAA được sử dụng để sản sinh rễ cho hầu hết các loại cây nhưng trong thí nghiệm này, đối với cây lan Kim tuyến (A. setaceus) IBA và
αNAA không có hiệu quả sản sinh rễ bất định.
3.2.2.3.Ảnh hưởng của sự phối hợp 2 nhóm chất là auxin và cytokinin đến sự phát sinh hình thái và hệ số nhân
Nhiều tác giả đã tổng kết rằng sự biệt hóa cơ quan thực vật in vitro là kết quả tác động qua lại giữa hai nhóm auxin và cytokinin. Tỷ lệ auxin/cytokinin cao sẽ kích thích sự ra rễ, trái lại sẽ đẩy mạnh sự biệt hóa chồi, ở tỷ lệ trung bình thì hình thành mô sẹo. Để nghiên cứu nhân nhanh nhằm thu được các chồi có chất lượng tốt cho các giai đoạn tiếp theo, chúng tôi tiến phối hợp giữa BAP, Kinetin và αNAA, IBA với các nồng độ khác nhau kết thu được từ thí nghiệm trên, BAP và kinetin khi sử dụng phối hợp theo tỷ lệ 0,5mg/l BAP + 0,3mg/l kinetin cho hiệu quả nhân nhanh tốt. Do đó, thí nghiệm được tiến hành trên nền môi trường trên phối hợp với IBA và α-NAA với các dải nồng độ từ 0,1 – 0,5 mg/l + 20g/l Sucrose + 20g/l ND + 100ml/l dịch chiết khoai tây + 7g/l agar. Kết quả thí nghiệm được thể hiện qua Bảng 3.6.
Bảng 3.6. Ảnh hưởng của sự phối hợp 2 nhóm chất là auxin và cytokinin đến sự phát sinh hình thái và hệ số nhân (kết quả theo dõi sau 8 tuần)
Công thức (mg/l) Số chồi (chồi/mẫu) Số đốt (đốt/chồi) Chiều cao TB chồi (cm) Đặc điểm chồi
CT1 (0,1mg/l IBA) 3,33 2,45 3,12 Chồi xanh nhạt, lá bé
CT2 (0,3mg/l IBA) 3,73 2,53 3,22 Chồi xanh đậm, lá bé
CT3 (0,5mg/l IBA) 4,85 2,49 3,52 Chồi xanh đậm, lá bé
CT4 (0,1mg/l α-NAA) 4,32 2,25 3,00 Chồi xanh nhạt, lá to
CT5 (0,3mg/l α-NAA) 6,56 2,77 3,52 Chồi xanh đậm, lá to
CT6 (0,5mg/l α-NAA) 5,45 2,31 3,02 Chồi xanh nhạt, lá to (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
CV% 2,8 1,8 2,9 LSD0,05 0,29 0,091 0,19 CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 CT6 (Sau 8 tuần) CT5 (Sau 12 tuần)
Hình 7. Ảnh hưởng của sự phối hợp auxin và cytokinin tới hệ số nhân chồi
Kết quả phân tích phương sai một nhân tố cho thấy, môi trường chứa các tổ hợp khác nhau của BAP và Kinetin có ảnh hưởng rõ rệt tới số chồi nhưng lại không ảnh hưởng nhiều đến chiều cao chồi. Sự phối hợp của hai nhóm cytokinin
(BAP, Kinetin) và auxin có ảnh hưởng rõ rệt đến sự phát sinh hình thái chồi và hệ số nhân.
Theo kết quả ở Bảng 3.6: Mẫu cấy trên môi trường chứa tổ hợp 0,5 mg/l BAP + 0,3 mg/l Kinetin + 0,3mg/l α-NAA cho số chồi cao nhất đạt (6,56 chồi/mẫu) nhiều hơn so với môi trường chứa tổ hợp 0,5 mg/l BAP + 0,3 mg/l Kinetin + 0,5mg/l IBA (4,85 chồi/mẫu) nhưng số đốt và chiều cao chồi thì lại thấp hơn. Sự phối hợp giữa cytokinin và auxin cho số chồi, số đốt và chiều cao chồi cao nhất (6,56 chồi/mẫu, 2,77 đốt/chồi và chiều cao trung bình chồi đạt 3,52 cm).
Như vậy, qua kết quả nghiên cứu về ảnh hưởng của các chất điều hòa sinh trưởng tới sự phát sinh hình thái và hệ số nhân chồi thấy rằng công thức môi trường thích hợp nhất để nhân nhanh là: Knud* +0,5mg/l BAP + 0,3mg/l Kinetin + 0,3 mg/l α-NAA + 20g/l Sucrose + 20g/l ND + 100ml/l dịch chiết khoai tây + 7g/l agar cho hệ số nhân cao, chất lượng chồi tốt, xanh, lá khỏe.