Vi khuẩn Lactic

3.1.2.1. Phân lập và tuyển chọn

Như đã đề cập ở phần 1.5.1, nhóm vi khuẩn lactic là một trong những nhóm vi khuẩn điển hình có ích đối với môi trường đầm nuôi trồng thủy sản. Nhiều loa ̣i vi khuẩn lactic c ó khả năng tổng hợp các chất kháng khuẩn có khả năng ức chế sinh trưởng của các vi khuẩn gây bê ̣nh , trong đó có vi khuẩn Vibrio. Các chất kháng khuẩn đươ ̣c xem như là các chất kháng sinh tự nhiên , không dùng trong y tế , không gây đô ̣c ha ̣i cho con người và môi trường , dễ phân giải sau mô ̣t thời gian sử du ̣ng nên không để la ̣i dư lượng trong sản phẩm. Vì vậy chúng tôi đã tiếp tục thực hiện đề tài với đối tượng là vi khuẩn lactic.

Từ tập hợp các chủng vi khuẩn lactic được phân lập từ các mẫu lên men chua trên môi trường MRS, chúng tôi đã tuyển chọn được chủng L5 có khả năng sinh bacteriocin kháng mạnh với Vibrio parahaemolyticus (25mm).

Bảng 3.8: Hoạt tính ức chế các vi sinh vật kiểm định của chủng L5 Chủng Hoạt tính kháng khuẩn (D-d,mm)

V. parahaemolyticus E. coli Salmonella typhi

L5 25 20 9

3.1.2.2. Phân loại

Phân loại theo phƣơng pháp truyền thống

Các đặc điểm sinh học của chủng L5 được trình bày trong bảng 15.

Bảng 3.9: Đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa của chủng L5

Đặc điểm Kết quả

Hình dạng khuẩn lạc Tròn, trắng đục

Hình dạng tế bào Que ngắn, xếp đơn lẻ hoặc tạo chuỗi ngắn

Kích thước tế bào 0,5 - 1,5 µm

Khả năng hình thành bào tử -

Hiếu khí tùy tiện +

54

Catalaza -

Khả năng di động -

Khả năng sinh axit 24,5 mg/l

Hoạt tính enzym ngoại bào (D-d,mm)

Proteaza 18

Xenlulaza 9

Amylaza 12

Khả năng đồng hóa đƣờng

Glucozơ + Tinh bột ± Dextrin + Lactozơ ± Sorbitol - Maltozơ +

Các kết quả ghi ở bảng 3.10 cho thấy, chủng vi khuẩn L 5 có dạng que ngắn , kích thước 0,5 – 1 µm, nhuộm Gram +, không có khả năng di đô ̣ng và không hình thành bào tử. Đây là vi khuẩn hiếu khí tùy tiê ̣n không có phản ứng catalase . Chủng L5 có khả năng đồng hóa nhiều loại đường . Khi so sánh các đặc điểm trên với khóa phân loại Bergey cho thấy chủng L5 là vi khuẩn lactic điển hình thuộc chi

Lactobacillus [62].

Phân loại theo phƣơng pháp sinh học phân tử

Trình tự rARN 16S của chủng L5 TTGGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGCCTAAAGAATCTAATACGACTGTTGAAATTTC AGCACCCGCACTTTAGCAGCAATTGAACGGGCATCCCTGTTATCCCACGAAAGTCGCAAT AATGTGGTTCGCTTCTCCGTTAACCAACGGACAAAACGATTACGATACATTTATCAAACGC TACAGGCCTTATATCAGCAACAACAAGAACGCTTTCGGTAACTCACCAGATGTCGGGGAA GTAACGGAACAACTACAGCCCACTGATTTGTCAGGTGACGAACTTGAAATTTCATTTAACC CAGACTACATGAAAGAAGCGTTACGTTCGTTTGGGCAAGCTATGATCAAAATCTCATTCAC GATGGCATTGCGCCCATTCACTTTAGTGCCAACTGAAGAAGGCGAAAACTTTATTCAGTTG ATTACACCAGTTCGAACGTTTTAATTAGCTGAATAAATATACAATTCTAAATAAAAGGCCC

55 GCATTTCACCGTGAAATGCGGGCCTTTTATGACGGCTAAAACTAGCTAAAGATGGGGCAA TGAATAGGCAATAGCGATGATGTAACTTTTGAAGTTTTAACTTATGCATATTATATTAGCT GCTGGTGAATTGTCACGCTAACTATCGATGTTGCCCTACTAAAATCCCACCATCTGATGAA CCCCAGTCCTTGCACTCGTTCGCTACAAACGCTCGCTTTCAGATAATGAATGCTGGCTTTA GCCAATTTTTATAGGTAAAAAACAAGATATTTTATTAAAATCCGCAAAATTAGGGAATTTC AGCAAATTTACCCCTAGGCTAGTATCCCGATATTAAAAAGCCCTAAATCGTCTTAAAATGG CTCTGAGTGCGGTTATAAATTGAATTTTCATCAAAAAACAAGTATAATATAACCTGTTAGG AGTGTGTGTAGCACGCCAGACAGTCGTTTAATAGCTTGTAATCAGATAGGCAGGTGACAT TGTGAAACAGCCAATAGATATTAAAACCCCATATATGACGTTGGGGCAACTCTTAAAAGAA ACGGCCATCATTGGATCGGGTGGTCAGGCGAAGTGGTTCTTAAAAGAAACAACCGTGTTA GTTAATGGTGAACCAGATGATCGGCGGGGTCGGAAACTTTATCCAGGCGATACGATTGAA GTTGAAGACAACGGGTCATTTTTTATTCGCTCAAATCAAGAAACGACTGATTAGATGTACT TAGAAAACTTAGTCTTGCATGATTTTCGGAACTACGCGGATTTGACCATTAATTTTAGTCA GGGCGTTAATGTTCTATTAGGTGAAAATGCGCAGGGAAAGACGAACCTGTTGGAAGCCAT TTATGTGTTGGCGTTAACGCGTAGTCACCGCACCGCTAACGATAAGGAATTAATTCGGTG GCAAACCACCACGGCAACGTTGCAAGGCCGGTTACATAAAAGTACCGGTGCTGTCCCCTT GGAACTTGAATTGGGGCGGCGGGGCAAGCGAGCGAAAGTCAATCATCTTGAGCAAGCCA AATTATCCCAGTACGTCGGAAATTTGAACGTGATCGTGTTTGCACCTGAAGATTTATCCAT CGTTAAAGGGGCACCCGCGGTTCGCCGTCGGTTTATGGATATGGAATTTGGTCAGATGAG CCCTAAATACCTCTATAACCTAAGTCAGTATCGCACGATTTTAAAACAACGTAATCAATAC TTACGGCAATTAAATCGGCAGCAGGCCAAGGATAAGGTTTATTTGGGTGTCTTGTCGGAT CAATTGGCTGCATTTGGTGCGGAAATCATCCATAAACGACTACAACTGTTGCAGCAACTTG AGAAATGGGCGCAAGCTGTTCACAGCGAGATTACGCAAGTGGACAGGCTGGATCACCTCC TTT

Hình 3.6: Trình tự nucleotit của rARN 16S của chủng L5

Xây dựng cây phân loại

So sánh trình tự rARN 16S của chủng L5 bằng phần mềm CLUSTAL và với các trình tự đã có sẵn thuộc chi Lactobacillus trong ngân hàng gen (Genbank), chúng tôi đã xây dựng được cây chủng loại phát sinh (hình 3.7).

56

Hình 3.7: Vị trí phân loại của chủng L5 và các loài có quan hệ họ hàng gần

So sánh với dữ liệu trong ngân hàng gen Quốc tế xác định được trình tự gen rARN 16S của chủng L5 tương đồng 99,9 % với đoạn rARN 16S của vi khuẩn

Lactobacillus plantarum.

3.1.2.3. Ảnh hưởng của một số yếu tố ảnh hưởng đến sự sinh trưởng và tổng hợp chất kháng khuẩn của L. plantarum L5

 Ảnh hưởng của pH ban đầu

L. plantarum L5 được nuôi cấy trên dịch MRS có pH thay đổi từ 4 đến 8, ở nhiệt độ 320C  2, trong 48h. Sau đó đem di ̣ch đo pH và phân tích khả năng sinh trưởng, khả năng kháng khuẩn . Đối với các thí nghiệm xác định khả năng đối kháng, dịch nuôi cấy được trung hòa bằng kiềm NaOH (0,1 N) tới pH trung tính để chắc chắn rằng vòng vô khuẩn ta ̣o ra không phải do axit mà là bacteriocin do vi khuẩn tiết ra. Kết quả được biểu diễn ở bảng 3.10.

PHYLIP_1 Streptomyces AB217603

L5 Lactobacillus plantarum GQ289387 1 00 Lactobacillus paracollinoides Lactobacillus lacrimicola Lactobacillus paraplantarum Lactobacillus durianis Lactobacillus sp AF51 6 8 6 0

Lactobacillus suebicus AB2

Lactobacillus sp AJ78

1 00

8 0

Lactobacillus uvarum EU3

Lactobacillus pentosus AB36

Lactobacillus vaccinostercus 8 5 6 6 Lactobacillus collinoides Lactobacillus paralimentarius 9 2 6 2 8 2 8 0 8 0

57

Bảng 3.10: Ảnh hƣởng của pH đến sự sinh trƣởng và khả năng tổng hợp chất kháng khuẩn của L. plantarum L5

pH đầu pH sau OD Hoạt tính kháng khuẩn (D-d,mm) Vibrio parahaemolyticus E.coli Salmonella typhi 4 3,8 0,468 11 9 2 5 3,6 0,924 21 18 5 6 4,0 1,207 25 20 10 7 4,5 1,354 24 19 9 8 5,2 1,173 18 15 3

Qua bảng ta thấy rằng L. plantarum L5 sinh trưởng được trên dải pH rộng, trong đó pH= 6 - 7 là phù hợp nhất cho sự sinh trưởng và hoạt tính kháng khuẩn. Ở pH hơi kiềm thì các chỉ số này có xu hướng giảm, còn ở pH = 4 khả năng sinh trưởng của L. plantarum L5 kém.

Hình 3.8: Ảnh hƣởng của pH đến sự sinh trƣởng và khả năng sinh tổng hợp chất kháng khuẩn của L. plantarum L5

58

 Ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy

Tiến hành nuôi cấy chủng L5 trên môi trường dịch MRS, cứ sau 24h xác định các chỉ số pH, OD và hoạt tính kháng khuẩn. Kết quả cho thấy thời gian L. plantarum L5 sinh trưởng và tổng hợp chất kháng khuẩn mạnh nhất là sau 48 giờ.

Bảng 3.11: Ảnh hƣởng của thời gian nuôi cấy đến sự sinh trƣởng và khả năng tổng hợp chất kháng khuẩn của L. plantarum L5

Thời gian (giờ) OD pH Hoạt tính kháng khuẩn (D-d,mm) Vibrio parahaemolyticus E.coli Salmonella typhi 24 0,804 4,8 15 8 0 48 1,085 4,3 25 19 10 72 0,988 4,5 21 14 5 96 0,721 5,0 18 11 3

Hình 3.9: Ảnh hƣởng của thời gian nuôi cấy đến sự sinh trƣởng và sinh chất kháng khuẩn của L. plantarum L5

59

Tiến hành nuôi cấy L. plantarum L5 trên môi trường dịch MRS có bổ sung các nồng độ muối từ 2 % - 10% . Sau 48 giờ thu di ̣ch làm các thí nghiê ̣m tiếp theo . Kết quả thu được thể hiê ̣n qua bảng và hình bên dưới.

Bảng 3.12: Ảnh hƣởng của nồng độ muối tới khả năng sinh trƣởng và tổng hợp chất kháng khuẩn của L. plantarum L5

Nồng độ

muối (%) OD pH

Hoạt tính kháng khuẩn (D-d,mm)

Vibrio

parahaemolyticus E.coli Salmonella typhi

2 1,197 4,2 23 18 8 4 0,971 4,5 16 11 4 6 0,562 5,0 10 4 0 8 0,129 6,0 0 0 0 10 0,091 6,3 0 0 0

Hình 3.10: Ảnh hƣởng của nồng độ muối tới khả năng sinh trƣởng và tổng hợp chất kháng khuẩn của L. plantarum L5

Kết quả biểu diễn trên đồ thị cho thấy chủng L5 có thể sinh trưởng và tổng hợp chất kháng khuẩn cao ở nồng độ muối 2 - 4%, đây cũng là nồng độ muối của các đầm nuôi thủy sản nước lợ và nước biển. Còn từ nồng độ muối 6% trở đi sự

60

sinh trưởng, sinh axit cũng như sinh chất kháng khuẩn của chủng kém đi, và gần như không còn ở nồng độ muối 10%.

* Với các đă ̣c điểm là vi khuẩn hiếu khí tùy tiê ̣n , chịu được môi trường có nồng đô ̣ NaCl cao , có khả năng kháng các vi khuẩn gây bệnh cho tôm cá (V. parahaemolyticus, E.coli và Salmonella typhi ), thuô ̣c nhóm vi khuẩn an toàn (vi khuẩn lactic đươ ̣c FDA xác nhâ ̣n là nhóm vi khuẩn an toàn - GRAS) như đã xác đi ̣nh được ở trên , chủng Lactobacillus plantarum L5 có thể được dùng để nghiên cứu ta ̣o chế phẩm xử lý nước nuôi trồng thủy sản.

3.1.3. Vi khuẩn nitrat hóa

Trong nuôi trồng thủy sản , tiêu chuẩn ngàng (28TCN – 171-2001) đối với lươ ̣ng amôni (NH3-N) là < 0,4 mg/l, với nitrat (NO3-) là <1 mg/l và với nitrit (NO2) là 0,1 mg/l. Nếu vượt quá ngưỡng này , tôm cá có thể bi ̣ bê ̣nh . Muốn đa ̣t được các chỉ tiêu trên cần phải tiến hành ox y hóa amôni thành nitrit và nitrit thành nitrat nhờ các vi khuẩn tự dưỡng . Phản ứng đầu nhờ vi khuẩn Nitrosomonas, phản ứ ng sau nhờ vi khuẩn Nitrosobacter. Do đó, nhóm vi khuẩn oxy hóa amôni và nhóm vi khuẩn oxy hóa nitrit tham gia vào quá trình nitrat thực hiện oxy hóa amôni thành nitrat đóng vai trò rất quan trọng trong việc làm giảm hợp chất nitơ gây độc cho tôm cá.

3.1.3.1. Phân lập và tuyển chọn vi khuẩn nitrat hóa

Chúng tôi tiến hành phân lập vi khuẩn oxy hóa amôni trên môi trường thạch Winogradsky I từ một số mẫu nước khác nhau, sau 6 ngày nuôi trong điều kiện hiếu khí ở 28oC đã thu được 13 chủng (bảng 3.13).

Cũng tương tự, vi khuẩn oxy hóa nitrit hóa được phân lập trên môi trường Winogradsky II, kết quả thu được 10 chủng (bảng 3.14).

Bảng 3.13: Đặc điểm hình thái của các chủng oxy hóa amôni phân lập đƣợc Ký hiệu

chủng Đặc điểm khuẩn lạc

Ký hiệu

chủng Đặc điểm khuẩn lạc NA1 - bé, đỏ nhạt, lồi, bóng,

d=0,5-1mm NA8

- vàng đậm, rất bé, nhẵn bóng, d < 0,5mm

NA2 - vàng nhạt,bóng,

d=1-1,3mm NA9

- trong, có nhân màu đỏ, bóng, d= 0,8-1mm

61

1,5mm

NA4 - màu cam, lồi, bé,

d=0,7mm NA11

- vàng chanh, to, dẹt, d=1,5-2mm

NA5 - bé, trắng, lồi, d=0,5mm NA12 - nâu rìa răng cưa, d= 1-

1,2mm

NA6 - trắng đục, dẹt, d=1-1,2mm NA13 - cam nhạt, dẹt, bóng, to,

d=1,5-1,8mm

NA7 - nâu đỏ, bóng, d=1mm

Bảng 3.14: Đặc điểm hình thái của 10 chủng oxy hóa nitrit phân lập đƣợc Ký hiệu

chủng Đặc điểm khuẩn lạc

Ký hiệu

chủng Đặc điểm khuẩn lạc NT1 - nâu, bóng, d = 0,5-1mm NT6 - nâu nhạt, dẹt, d= 1,5mm

NT2 - vàng chanh, lồi,

d = 0,5-0,8mm NT7

- trắng đục, bề mặt khô, d = 0,3 - 0,5mm

NT3 - hồng, nhẵn bóng, d = 0,5 -

1mm NT8

- trắng đục, dẹt, bóng, d = 0.5mm

NT4 - trắng trong, bé NT9 - màu đỏ, rìa trong, d =

1,5-1,7mm

NT5 - da cam, lồi, d= 0,8 - 1mm NT10 - nâu trong, bé, bóng,

d=0,3 – 0,5 mm

Để xác định khả năng chuyển hóa của các vi khuẩn nitrat hóa phân lập được, chúng tôi tiến hành định lượng nitrit tạo thành dựa trên phương pháp Griss trên môi trường Winogradsky I và hàm lượng nitrat tạo thành theo phương pháp Brucine trên môi trường Winogradsky II sau 7 ngày nuôi lắc. Sinh trưởng của vi khuẩn được xác định thông qua đo mật độ quang học OD. Kết quả được trình bày ở bảng 3.15 và 3.16.

Bảng 3.15: Hàm lƣợng nitrit tạo thành và sự sinh trƣởng của 13 chủng oxy hóa amôni phân lập đƣợc

62 (mg/l) (mg/l) NA1 0,413 1,71 NA8 0,539 2,88 NA2 0,735 3,26 NA9 0,980 4,21 NA3 1,316 5,23 NA10 1,728 6.86 NA4 0,909 4,13 NA11 0,511 2,56 NA5 0,492 1,55 NA12 1,674 6,12 NA6 0,689 2,14 NA13 0,755 3,70 NA7 1,869 7,06

Bảng 3.16: Hàm lƣợng nitrat tạo thành và sự sinh trƣởng của 10 chủng oxy hóa nitrit Chủng OD Hàm lƣợng NO3 - (mg/l) Chủng OD Hàm lƣợng NO3- (mg/l) NT1 1,597 6,05 NT6 1,407 4,16 NT2 1,658 6,88 NT7 1,612 6,57 NT3 0,554 2,97 NT8 1,145 4,07 NT4 1,545 5,12 NT9 0,666 3,56 NT5 1,636 5,75 NT10 0,856 4,32

Trong cùng một điều kiện nuôi cấy như nhau, từ 13 chủng oxy hóa amôni phân lập được chúng tôi đã chọn được chủng NA7 và từ 10 chủng oxy hóa nitrit phân lập được đã chọn được chủng NT2 có khả năng chuyển hóa các hợp chất chứa nitơ cao hơn cũng như sinh trưởng trội hơn các chủng còn lại.

3.1.3.2. Đặc điểm hình thái, sinh hóa của 2 chủng vi khuẩn nitrat hóa lựa chọn

Bảng 3.17: Một số đặc điểm hình thái, sinh hóa của chủng NA7 và NT2 Đặc điểm Chủng NA7 Chủng NT2

Hình dạng khuẩn lạc nâu đỏ, bóng, d=1mm vàng chanh, lồi, d=0,5-0,8mm

63

Hình dạng tế bào Que ngắn Que thẳng

Kích thước tế bào 1,0 x 1,5 µm 0,7 x 2,0 µm

Nhuộm Gram Gram (-) Gram (-)

Khả năng chuyển hóa nitơ Oxy hóa amôni Oxy hóa nitrit

Khả năng chịu muối 4% 4%

Theo khóa phân loại Bergey, chủng vi khuẩn oxy hóa amôni NA7 có đặc điểm đặc trưng của vi khuẩn thuộc chi Nitrosomonas. Còn chủng vi khuẩn oxy hóa nitrit NT2 có đặc điểm đặc trưng của vi khuẩn thuộc chi Nitrobacter.

3.2. Tạo chế phẩm

Sự chuyển hóa vâ ̣t chất trong tự nhiên là hết sức phức ta ̣p . Viê ̣c xử lý nước thải nuôi trồng thủy sản không phải là sử dụng một loài vi sinh vật thuần khiết nào đó mà là cả mô ̣t hỗn hợp nhiều loài , tạo ra sự chuyển hóa hài hòa trong to àn bộ chuỗi vâ ̣n chuyển . Mỗi loài sinh vâ ̣t sẽ thực hiê ̣n mô ̣t hoă ̣c vài mắc xích trong toàn bô ̣ chuỗi chuyển hóa.

Các chủng vi sinh vật được lựa chọn nhằm sản xuất chế phẩm phải có hoạt tính sinh học cao : khả năng phân giả i ma ̣nh các cơ chất , thời gian mo ̣c nhnah , tích ứng rộng ở cá c pH và nhiê ̣t đô ̣ khác nhau , có khả năng kháng các chủng gây bệnh . Các chủng vi sinh vật có hoạt tính sinh học cao thì khi sử dụng sẽ nhân nhanh sinh khối trong mô ̣t thời gian ngắn, tiết ra mô ̣t lượng lớn enzym phân giải.

Sau khi làm các thí nghiê ̣m phân lâ ̣p và tuyển cho ̣n , chúng tôi quyết định sử dụng 4 chủng vi khuẩn Bacillus TL1, L. plantarum L5, Nitrosomonas sp. NA7 và

Nitrobacter sp. NT2 để tạo chế phẩm xử lý nước nuôi trồng thủy sản bi ̣ ô nhiễm.

3.2.1. Thử tính đối kháng lẫn nhau của các chủng vi khuẩn

Kiểm tra tính đối kháng giữa các chủng vi sinh vâ ̣t đã tuyển cho ̣n để xem trong quá trình sinh trưởng và phát triển chúng có ức chế nhau không là viê ̣c làm rất cần thiết. Bởi vì nếu các chủng vi sinh vâ ̣t không ức chế nhau thì chúng ta mới có thể phối trô ̣n chúng vào chung mô ̣t chế phẩm được.

Các chủng được nuôi lắc trên môi trườn g thích hợp, sau đó thu di ̣ch nuôi có chứa kháng sinh . Thử khả năng đối kháng của các chủng theo phương pháp nhỏ

64

dịch. Kết quả được cho thấy các chủng này không có đối kháng nhau . Đây là cơ sở để có thể đưa các chủng này vào trong cùng một chế phẩm.

Bảng 3.18: Thƣ̉ tính đối kháng lẫn nhau của các chủng vi khuẩn

Chủng Bacillus TL1 L. plantarum L5 Nitrosomonas sp. NA7 Nitrobacter sp. NT2 Bacillus TL1 L. plantarum L5 Nitrosomonas sp. NA7 Nitrobacter sp. NT2

3.2.2. Nghiên cứu các điều kiê ̣n lên men xốp thích hợp

Khi đã có 4 chủng vi khuẩn : Bacillus TL1, L. plantarum L5, Nitrosomonas sp. NA 7 và Nitrobacter sp. NT2 chúng tôi tiến hành sản xuất chế phẩm dạng rắn.

3.2.2.1. Lựa chọn môi trường lên men xốp thích hợp

Có thể nói việc lựa chọn môi trường lên men để sản xuất chế phẩm nào đó có vai trò hết sức quan trọng, bởi lẽ thành phần dinh dưỡng trong môi trường lên men phải phù hợp với sự sinh trưởng, phát triển của từng chủng vi sinh vật, và tạo điều kiện kích thích sự hình thành các hoạt tính sinh học của chúng, đồng thời lại phải đảm bảo yếu tố nguồn nguyên liệu sẵn có, dễ kiếm và rẻ tiền.

Chúng tôi tiến hành nuôi cấy c hủng vi khuẩn Bacillus TL 1 và T. plantarum

L5 trên nguồn cơ chất khác nhau như cám ngô, cám gạo, bô ̣t đâ ̣u tương, trấu với đô ̣ ẩm thích hợp . Sau 4 ngày xác định các hoạt tính enzym bằng phương pháp nhỏ dịch.

Kết quả được thể hiê ̣n trong bảng 3.19 và bảng 3.20. Cả hai chủng vi khuẩn

Bacillus TL1 và L. plantarum L5 đều sinh trưởng và thể hiê ̣n hoa ̣t tính enzym ma ̣nh khi đươ ̣c lên men xốp trên các môi trường như cám ngô , cám gạo, bô ̣t đâ ̣u tương . Đặc biệt, vi khuẩn này cho kết quả cao nhất khi lên men trên môi trường cám : trấu (tỷ lệ 1: 1).

65

Bảng 3.19: Ảnh hƣởng của môi trƣờng lên men xốp lên Bacillus

Nguồn cơ chất Hoạt tính enzym

Kitinaza Proteaza Xenlulaza Amylaza

Cám ngô 24 16 20 21

Cám gạo 26 17 22 20

Cám ngô + bô ̣t

đâ ̣u tương 22 15 19 20

Cám gạo + bô ̣t

đâ ̣u tương 20 15 20 22

Cám ngô + trấu 24 20 24 22

Cám gạo + trấu 35 30 32 33

Bô ̣t đâ ̣u tương +

trấu 25 18 20 19

Bảng 3.20: Ảnh hƣởng của môi trƣờng lên men xốp lên L. plantarum L5:

Nguồn cơ chất

Hoạt tính kháng khuẩn

Vibrio